Идентификация грызунов I

Правильная идентификация лабораторных животных является фундаментальным требованием биомедицинских исследований. Для исследователей важно уметь различать отдельных животных, чтобы использовать правильное животное для экспериментальных процедур и сбора данных. Ученые разработали несколько постоянных и временных методов идентификации отдельных лабораторных животных. Здесь мы обсудим два наиболее часто используемых метода: бирку ушами и пробивание ушей.

Прежде чем углубиться в процедуру пробивки ушей, давайте познакомим вас с кодом пробивки ушей, доступными типами перфораторов, а также обсудим преимущества и недостатки этого метода. Как вы уже догадались, пробивание ушей включает в себя пробивание отверстия или выемки в наружном ухе или ушной раковине животного. Для того, чтобы стандартизировать этот метод, были разработаны универсальные коды ушных перфораторов.

В зависимости от положения, выемки на правом ухе представляют собой однозначные цифры, такие как 1, 3 и 5, а двойная выемка представляет 2. Используя различные комбинации этих зазубрин и суммируя значение для каждой выемки, вы можете пометить животное от 1 до 9. Точно так же на левом ухе те же насечки представляют собой десятки. И опять же, различные комбинации будут покрывать диапазон от 10 до 90. Отверстия в центре правой и левой ушной раковины представляют собой 100 и 200 соответственно. И отверстия в обоих указывают на 300. Поэтому, например, если вы хотите пометить животное 173, вы должны пробить отверстие в центре правого уха на 100, три зарубки в левом году, которые в сумме дают 70, и одну выемку в верхнем правом ухе, обозначающую место единицы «три».

Теперь давайте обсудим три стиля коммерчески доступных ушных пробойников: ножничный пробойник, пробойник для большого пальца и рычажный пробойник. Каждый из них имеет свои преимущества и недостатки.

Удар большим пальцем требует сжимающих движений, но достаточно мал, чтобы поместиться в трубку Eppendorf, чтобы легче собрать ушную ткань. С точки зрения эргономики, рычажный пробойник проще в использовании, чем пробойник для большого пальца, особенно для более толстых ушей старых крыс. Ножничный пробойник не требует сжимающего движения, что позволяет избежать усталости и травм запястного канала.

Несмотря на то, что это быстрый и простой метод идентификации, пробивание ушей имеет некоторые ограничения. Во-первых, код ушного перфоратора, о котором говорилось выше, имеет верхний предел 399, что может ограничить использование этого метода в некоторых крупномасштабных исследованиях. Еще одно ограничение заключается в том, что большинство животных должны быть схвачены за загривок, чтобы прочитать код, что увеличивает время работы с ними. По мере старения крыс кожа их ушей утолщается, и трудно выполнить удар по уху, не причинив значительного стресса животному. Поэтому лучше всего проводить прокалывание ушей молодым крысам по мере их отлучения от груди. Для взрослых крыс, которым требуется идентификация, следует рассмотреть возможность использования ингаляционной анестезии при выполнении ушных ударов.

Теперь, когда у вас есть некоторая справочная информация о коде ушного перфоратора и типах доступных инструментов, давайте узнаем, как выполнить эту технику на мышах.

Перед началом процедуры рекомендуется промыть пробивные инструменты дезинфицирующим раствором, промыть спиртом, а также тщательно просушить. Избегайте автоклавирования ушных проколов, так как это в конечном итоге приведет к их притуплению.

Для начала определитесь с экспериментальным кодом животного и тем, какой удар будет использоваться. Давайте возьмем код 173 и пробойник в качестве примеров. Та же процедура применима к любому другому коду или перфоратору. Когда вы будете готовы, удержите животное, схватив его за загривок так, чтобы уши были легко доступны. Начните с отверстия на 100. Поместите правое ухо в дырокол так, чтобы отверстие пуансона располагалось подальше от края ушной раковины. Затем надавите, чтобы быстро и сильно закрыть ножницы, чтобы разрезать кожу. Затем отпустите пунш и удалите его из уха. Избегайте вытягивания или скручивания пуансона, чтобы предотвратить разрыв уха. Чтобы сделать выемку, поместите пробойник на край ушной ушной раковины в нужном месте, в данном случае в верхней части правого уха за «тройку» в месте единицы кода, и проделайте то же самое – быстро и сильно надавите, а затем откройте ножницы, чтобы снять его. Повторите ту же процедуру на другом ухе, чтобы пробить три насечки - две для "20" возле внешнего угла и одну для "50" возле внутреннего угла, в общей сложности код "70".

Убедитесь, что был введен правильный код, прежде чем добавлять животное обратно в клетку. Снова очистите пуансон дезинфицирующим средством, промойте спиртом и тщательно высушите, чтобы не допустить ржавчины.

Теперь перейдем к бирке на ушах, которая является еще одним недорогим и простым в исполнении методом индивидуальной идентификации мышей и крыс. Существует множество коммерчески доступных ушных бирок. К ним относятся: металлические бирки с выгравированным на них рядом цифр и/или букв, а также пластиковые бирки с символами или штрих-кодами на ярко окрашенном фоне.

Одним из недостатков металлических бирок является то, что часто приходится брать животное на руки для того, чтобы прочитать код. В отличие от них, пластиковые бирки легко читаются без необходимости брать в руки животных. Еще одним преимуществом пластиковых меток является их совместимость с МРТ-визуализацией. Хотя метки обеспечивают индивидуальный идентификатор мыши или крысы, они не являются непогрешимыми. Метки могут быть потеряны из-за чрезмерного груминга, дерматита или инфекции, самотравмы, нанесенной при попытке удалить метки из-за непереносимости, драк и агрессивного поведения при размножении. Если в одной клетке содержится несколько животных, потеря ушной бирки может стать проблемой. Чтобы обойти эту проблему, следует использовать вторичную форму идентификации, такую как перфокод на ухе напротив бирки. Учреждение должно стандартизировать как выбор уха, которое должно быть помечено, так и код, который будет использоваться на другом ухе, и все коды должны быть указаны на карточке клетки.

Теперь давайте узнаем, как правильно наносить ушную бирку, так как неправильное позиционирование может иметь несколько печальных последствий. После нанесения мы также обсудим удаление ушной бирки, которое обычно выполняется в случае инфекции из-за применения бирки.

Первым шагом является выбор подходящей бирки для животных, которых необходимо идентифицировать. Здесь мы будем использовать металлическую метку для демонстрации процедуры на мышах. Обязательно закажите аппликатор, соответствующий конкретному размеру и стилю используемых ушных бирок. Аккуратно снимите бирку с картонного держателя и встаньте в аппликатор так, чтобы конец с отверстием располагался над выемкой на участке аппликатора. Заостренный конец бирки должен находиться напротив выемки.

Когда вы будете готовы наложить ушную бирку, задержите животное так, чтобы уши были легко доступны. Животные могут быть менее склонны к борьбе, если задние конечности могут опираться на поверхность, такую как столешница клетки или столешница. Как только животное будет удержано, расположите острие ушной бирки глубоко в раковине уха так, чтобы номера бирок были обращены к спине животного. Затем плотно сожмите аппликатор; Ушная бирка проколет ухо и зафиксируется вместе. Когда вы отпустите, помеченное ухо выпадет из аппликатора. Убедитесь, что метка правильно расположена и применена. Если вы предпочитаете, чтобы номера ушных бирок были обращены к носу животного, поместите острие бирки у основания ушной раковины на задней части уха, а затем сожмите, чтобы зафиксировать бирку на месте.

Метки должны быть размещены таким образом, чтобы они не вызывали изгиба уха, не мешали подвижности животного и не зацеплялись за какую-либо часть клетки. Если бирку расположить слишком близко к краю уха, ее можно легко порвать. При расположении слишком близко к голове кожа в области шеи может зацепиться за метку, вызывая раздражение, боль и ограничение движений, что затем может привести к самотравме. Иногда металлические бирки могут вызывать раздражение и отек уха. Это часто приводит к инфицированию ушной раковины, и немедленное лечение должно включать удаление метки.

Для того чтобы снять бирку, смочите аппликатор с ватным наконечником антисептическим раствором и с его помощью удалите любой мусор вокруг бирки. В тяжелых случаях заражения животному может потребоваться обезболивание. Затем с помощью кусачек разрежьте верхнюю часть петли бирки от края до края. Главное, не режьте плоскую поверхность, так как это сожмет метку, защемит ухо и приведет к повреждению уха. С помощью гемостатиков аккуратно проведите ушную бирку через ухо и наружу уха. Выдвиньте бирку так, чтобы обжатый конец не прошел насквозь, что привело к травматизации и увеличению отверстия для пирсинга. Как только бирка исчезнет, протрите ухо антисептической ватной палочкой-аппликатором и верните животное в клетку. При наличии гнойных выделений из уха может потребоваться последующее лечение и рекомендуется консультация с ветеринарным персоналом для оценки.

Теперь, когда вы знаете, как помечать лабораторных животных с помощью ушных бирок и перфораторов, давайте рассмотрим некоторые эксперименты, в которых эти методы могут быть полезны. Одним из основных преимуществ использования кода ушных пробивок является то, что пробойники могут использоваться в качестве образцов тканей для генотипирования, тем самым снижая стресс для животных, вызванный повторным обращением. Однако, если вы планируете использовать перфораторы для сбора образцов ПЦР, не забудьте сначала замочить аппарат в растворе поверхностного обеззараживающего средства не менее чем на 3 минуты для удаления остатков ДНК или РНК, а затем промыть спиртом перед использованием.

Важность метода идентификации еще больше возрастает, если эксперимент длится несколько дней. Например, в этом эксперименте ученые сначала пометили животных с помощью металлической метки, а затем ввели в седалищный нерв суспензию трансгенных опухолевых клеток, экспрессирующих белок люциферазы. Затем, чтобы количественно оценить прогрессирование рака, они визуализировали животных с помощью биолюминесценции через один, десять и восемнадцать дней после инъекции.

Вы только что посмотрели презентацию JoVE, в которой продемонстрированы два наиболее часто используемых метода идентификации у грызунов: ушные бирки и ушные пробивки. Теперь вы должны понимать код ушного прокола, знать различные типы коммерчески доступных ушных бирок грызунов и уметь точно выполнять эти процедуры, не вызывая значительного дискомфорта у животных.

Помните, что каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, которые необходимо учитывать в связи с вашими экспериментальными потребностями. В дополнение к рассмотрению стоимости, простота метода и уровень боли для животных должны быть одними из основных соображений при выборе подходящего метода идентификации. Как всегда, спасибо за просмотр!