Введение компаунда III

1. Внутрикожное введение

1. Большинство внутрикожных инъекций представляют собой соединения на водной основе. Растворы должны быть физиологически буферизованы, чтобы иметь нейтральный pH, чтобы избежать некроза тканей в месте инъекции.
2. Диапазон размеров игл составляет 25-30 калибр, максимально возможный.
3. Диапазон доз на место инъекции составляет 50-100 мкл. Введение чрезмерных объемов может привести к некрозу в месте инъекции или вытеканию соединения из места инъекции из-за давления.
4. Для точного размещения иглы во внутрикожное пространство необходимо обезболивать как мышей, так и крыс. Ингаляционная анестезия позволяет провести быструю индукцию и восстановление; Тем не менее, инъекционная анестезия имеет преимущество, заключающееся в том, что она предоставляет достаточно времени для подготовки области и выполнения инъекции. ¹
5. Удалите волосы в месте инъекции с помощью крема для депиляции или путем бритья этой области.
6. Тщательно удалите остатки крема для депиляции или остатки волос.
7. Нанесите антисептик местного действия, например, раствор йода, раствор хлоргексидина или спирт.
8. Процедуры администрирования
   1. Натяните кожу между большим и указательным пальцами. Это обеспечивает устойчивость кожи при позиционировании иглы.
   2. Поместите иглу скосом вверх на кожу.
   3. Аккуратно введите иглу в кожу между эпидермисом и дермой. Переместите иглу сразу за пределы скоса.
   4. Вводите вещество медленно. Инъекция соединения создаст пузырь или небольшой волдырь на коже.
   5. Сделайте паузу после инъекции, чтобы дать коже растянуться и приспособиться, прежде чем извлекать иглу.
9. Профилактика
   1. Оттягивать поршень назад не нужно.
   2. Если игла вводится в подкожное пространство, пузырь не образуется. Слишком глубокая инъекция приводит к подкожной инъекции.
   3. Избегайте промокания или протирания этой области, так как это может привести к утечке соединения из места инъекции.
   4. При выполнении нескольких инъекций делайте их так, чтобы пузырьки не перекрывались.

Рисунок 1. Внутрикожное введение мышам.

2. Интраназальное введение

1. Оборудование
   1. Используйте дозатор с микропипеткой, который можно откалибровать для получения точного объема.
   2. Во избежание перекрестного загрязнения следует использовать одноразовые наконечники для пипеток. Для дозирования также можно использовать противотуберкулезные шприцы, тупые иглы и гибкие трубки.
   3. Общий объем инъекций крысам не должен превышать 40-100 мкл, а вводиться следует по 6-10 мкл капель. Для мышей максимальный общий объем составляет 24 мкл, вводится в каплях по 3-4 мкл.
2. Применение у животных, находящихся в сознании
   1. Ручное удержание у животных, находящихся в сознании, требует, чтобы голова была относительно неподвижной, чтобы кончик пипетки или тупой иглы можно было разместить достаточно близко к ноздрям для доставки соединения, но не настолько близко, чтобы проткнуть или разорвать ткань носа.
   2. Удерживайте животное и удерживайте его в вертикальном положении.
   3. Поместите небольшую каплю жидкого состава в носовое отверстие. Животное должно вдохнуть каплю.
   4. Введите дополнительный объем, чередуя ноздри до тех пор, пока не будет введен весь объем.
   5. При введении больших объемов важно не сжимать грудную клетку во время фиксации. Компрессия грудной клетки препятствует способности животного делать достаточно глубокие вдохи, чтобы втянуть жидкость в бронхи и легкие.

Рисунок 2. Интраназальное введение мышам в сознании.

3. Применение у животных без сознания
   1. Использование ингаляционных анестетиков позволяет обездвижить животное во время приближения и доставки состава. Это исключает возможность укуса животного дозирующего оборудования, потерю состава из-за подергивания головы и травмирование тканей носа, глаз или кожи морды животного. Животное также с меньшей вероятностью будет фыркать и распылять соединение из ноздрей при введении.
   2. Поместите животное в положение лежа на спине. Положение головы влияет на расположение раствора в ноздрях. Было продемонстрировано, что идеальная позиция для доставки ЦНС - лежа на спине животного; Это обеспечивает лучшее впитывание. ²
   3. Вводите половину состава непосредственно в одну сторону носового отверстия, приурочивая это к вдоху. Затем переверните животное.
   4. Как указано выше, введите вторую половину объема в другое носовое отверстие.

Рисунок 3. Интраназальное введение мышам без сознания.

3. Внутричерепное введение неонатальным мышам и крысам

1. Мышей или крыс необходимо обезболить для внутричерепных инъекций.

Мышь		Крыса
Возраст (дни)	Игольчатый калибр (г)	Возраст (дни)	Игольчатый калибр (г)
0-7	29-30	0-5	27-29
7-14	27	5-10	25-27
14-28	25	10-14	25
Возраст (дни)	Длина иглы (мм)	Возраст (дни)	Длина иглы (мм)
0-7	2	0-4	2-3
7-14	3	4-7	3
14-21	4	7-10	4
21-28	5	10-14	5
Возраст (дни)	Объем (μл)	Возраст (дни)	Объем (μл)
0-5	<20	1-3	<20
6-20	<60	4-10	<60
20-28	<100	11-14	<100

Таблица 1. Калибр иглы, длина иглы и максимальный объем внутричерепного введения в зависимости от возраста мышей и крыс. ⁴

2. Оборудование
   1. Определите правильный калибр иглы и максимальный объем введения в соответствии с таблицей Таблица 1.
   2. Перед обезболиванием животного подготовьте гарду для игл.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Глубина инъекции иглы контролируется с помощью защитного кожуха, созданного с помощью колпачка иглы.
      1. Для создания гарды игла измеряется относительно колпачка иглы, а на колпачке ставится метка, указывающая, где нужно резать. Надрез должен быть сделан таким образом, чтобы при замене колпачка на игле обнажалось от 2 до 5 мм иглы.
      2. Длина выставленной иглы должна быть достаточной для того, чтобы проникнуть в кожу и череп и достичь желаемой глубины в мозге.
      3. Длина игл, необходимая для мышей и крыс, указана в таблице Таблица 1.
   3. Источник тепла необходим для предотвращения переохлаждения у детенышей. Существует несколько видов: электрическая грелка, установленная на низком уровне, одеяло для циркуляции воды или многоразовый термомешочек для химической реакции.
3. Сдержанность
   1. Мышиные и крысиные щенки в возрасте 10 дней и младше не нуждаются в анестезии для этой процедуры. Ограничьте их вручную, держа их прямо за головой и натягивая кожу каудально, чтобы слегка надавить на плечи.
   2. Обезболите щенков старше 10-дневного возраста ингаляцией изофлураном. Прикрепите индукционную камеру к прецизионному испарителю или банке-колокольчику с ватным шариком, смоченным изофлураном. После того, как щенок обездвижен, анестезия эффективна в течение примерно 40 секунд, что дает достаточно времени для инъекции.
4. Техника инъекций
   1. Наберите вещество в шприц и наденьте колпачок/направляющую иглы на иглу.
   2. Рекомендуемый объем инъекции в качестве максимального объема на одну неонатальную мышь или крысу составляет 100 мкл, а для отлученных от груди или более старых мышей — до 300 мкл.
   3. Для инъекции в кору головного мозга новорожденных иглу вводят на 5 мм позади глаза, примерно в 3 мм от средней линии черепа.
   4. Место инъекции мыши-отъемыша находится примерно на полпути между глазом и ухом и находится недалеко от средней линии.

Рисунок 4. Внутричерепное введение детенышу мыши.