Капиллярный электрофорез (КЭ)

1. Настройка контрольно-измерительных приборов CE

1. Включите прибор CE и компьютер. С помощью компьютерного программного обеспечения включите источник света для УФ-анализа, чтобы дать ему нагреться. В некоторых программах есть индикатор, когда лампа готова к использованию (значок лампы становится цветным).
2. Создайте файл методов. Установите важные параметры для запуска CE. В этом анализе температура картриджа и хранилища образца составляет 35 °C. Длина волны для обнаружения ультрафиолета составляет 214 нм.
3. Напишите программу времени. Программа обычно состоит из этапов промывки (для очистки капилляра перед анализом), этапов инъекции, а затем этапа электрофореза. На этапе полоскания выполните 2 полоскания в течение 1 минуты при давлении 20 фунтов на квадратный дюйм. Первое полоскание проводится с помощью NaOH, который помогает убедиться, что силанольные группы на стенке капилляра депротонированы. Вторая промывка проводится с помощью буфера (в данном случае 0,025 М боратного буфера), чтобы убедиться, что капилляр остается сбалансированным с буфером.
4. Для впрыска используется впрыск под давлением 0,5 фунта на квадратный дюйм в течение 5 с.
5. Для стадии электрофореза условия следующие: напряжение разделения: 20 кВ, время: 5 мин, нормальная полярность. Для каждого шага также укажите, какой флакон является входным, а какой — выходным. Сохраните файл методов после ввода всех параметров.

2. Подготовка стандартов и образцов газировки

1. Приготовьте 500 ppm исходных растворов аспартама, кофеина и бензойной кислоты в воде. Внесите по 50 мл каждого, используя мерную колбу.
2. Приготовьте стандартный раствор из 150 ppm аспартама, 150 ppm кофеина и 100 ppm бензойной кислоты в мерной колбе объемом 10 мл.
3. Приготовьте стандартные растворы кофеина 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm и 200 ppm в объемных колбах объемом 10 мл.

3. Запустите образцы на CE

1. Поместите флаконы со стандартными образцами или образцами соды в держатель флакона с образцами. Обязательно запишите, какой образец в каком слоте находится. Два слота имеют буфер для боратного хода и раствор для промывки NaOH 0,1 М.
2. В файле метода укажите, в каком слоте находится первый флакон с образцом.
3. Получите один прогон, убедившись, что введены все данные, запрошенные программой.
4. Продолжайте сбор данных, меняя входной флакон для каждого образца. Проведите стандартную комбинацию, 3 концентрации кофеина, а также образец Pepsi и диетической Pepsi.
5. Вставьте мишень в инструмент и выберите подходящий инструмент.
6. Анализируйте данные на компьютере. Рассчитайте площади пиков и стандарты наложения и реальные выборки, чтобы помочь определить пики. Постройте калибровочную кривую для данных о кофеине.