Забор крови II

Сбор крови у мышей и крыс необходим для проведения самых разных научных исследований, и исследователи разработали различные методы для достижения конкретных экспериментальных целей.

В первой статье мы обсудили общие соображения по изъятию крови и рассмотрели ретроорбитальное кровотечение из глаз, хвостовые ножи и порезы, а также методы забора крови внутри сердца. Здесь мы опишем процедуры забора крови из лицевой, подчелюстной, подкожной и бедренной вен. Эти методы являются менее инвазивными и не требуют анестезии, что делает их методами выбора, когда использование анестетиков может исказить результаты крови или другие данные.

Начнем с процедуры получения образца крови из мышиной лицевой вены. На мышке есть легкодоступная лицевая вена, которая проходит через щеку. Начните с выбора подходящего оборудования для проведения процедуры. В основном, нужна небольшая центрифужная пробирка для сбора крови и ланцет, который выпускается разных размеров. Выбор правильного ланцета зависит от возраста, пола и массы тела животного, а также размера образца, который будет собран. Смотрите текстовый протокол для получения подробной информации о выборе ланцета.

Начните процедуру с удержания животного с помощью техники загривки. Надлежащая фиксация сводит к минимуму движения головы из стороны в сторону и помогает обеспечить точную и безопасную венепункцию с помощью ланцета. Если хват слишком тугой, кровоток может быть ограничен, что приведет к уменьшению собираемого объема. После того, как животное будет удержано, определите приблизительную область лицевой вены, измерив длину глаза ниже бокового кантуса и ширину глаза каудально. Кончиком ланцета аккуратно нащупайте точку, на которой заканчивается челюстная кость. Для повышения точности прокола сосуда вы можете расположить мышь на боку.

Теперь в месте введения держите ланцет перпендикулярно поверхности кожи кончиком слегка к носу. Это имеет решающее значение, потому что если кончик ланцета направлен каудально, слуховой проход будет прокалываться, что вызовет кровотечение из уха. Чтобы проколоть вену, нанесите сильный толчок и проколите кожу до плеча ланцета. После удаления кровь начнет течь. Чтобы облегчить поток, расположите животное так, чтобы голова была ниже сердца. Чтобы остановить кровотечение, промокните место прокола для достижения гемостаза и предотвращения чрезмерной кровопотери. Наконец, ослабьте давление на загривок и верните животное в клетку. Обратите внимание, что объемы сбора могут варьироваться, но крайне важно НЕ превышать максимальный объем для сбора крови для выживания. Смотрите текстовый протокол видео Blood Withdrawal One для получения подробной информации о рекомендуемом максимальном объеме забора. Серийные образцы могут быть взяты путем чередования используемой стороны. Ни одну из сторон не следует использовать чаще, чем раз в 5-7 дней.

Теперь давайте рассмотрим метод кровотечения из подчелюстных вен. Хотя это очень похоже на технику кровотечения из лицевой вены, существуют различия в оборудовании и тонкие различия в процедуре кровотечения.

Подчелюстная вена проходит вдоль нижней челюсти мыши и сходится с лицевой веной в яремную вену. Вместо ланцета этот метод выполняется с помощью игл. Но, как и в случае с ланцетами, выбор игольчатого калибра зависит от возраста, пола, веса животного и размера выборки - подробности см. в текстовом протоколе.

Для начала взмахните животное таким же образом, как и для кровотечения из лицевой вены, чтобы было минимальное движение головы из стороны в сторону. Помните - слишком тугой хват может уменьшить объем сбора крови. Удерживая мышь, представьте себе линию от уголка рта через лицо и линию от бокового кантуса глаза. Точкой пересечения этих линий является приблизительная площадь подчелюстной вены. Это совпадает с небольшой безволосой ямочкой, расположенной каудально к углу рта и немного ниже линии челюсти.

Для лучшей точности поместите животное в боковое лежачее положение (3.6.1). Далее держите иглу перпендикулярно поверхности кожи и введите ее с сильным нажатием. ЗАПРЕЩАЕТСЯ вводить иглу за пределы кончика скоса, так как большая глубина введения может привести к травме мышц, нервов и других сосудов головы, шеи и полости рта. После извлечения иглы кровь начнет течь. Как и при кровотечении из лицевых вен, расположите мышь так, чтобы голова была ниже сердца, чтобы помочь кровотоку. Наконец, промокните место прокола, чтобы добиться гемостаза и ослабить давление на загривок, чтобы вернуть животное в клетку.

Теперь давайте узнаем, как собирать кровь из подкожной вены. Эта вена представляет собой поверхностный сосуд, который проходит дорсально, а затем латерально через тарзальный сустав.

Оборудование, которое вам понадобится для этой процедуры, включает в себя удерживающее устройство, которое может быть гибким пластиковым для крыс или, для мышей может использоваться модифицированная 50-миллилитровая пластиковая коническая трубка. Обратите внимание, что конец трубки обрезается, чтобы обеспечить отверстие для дыхания, а от конца колпачка вырезается прорезь шириной полдюйма и длиной 2 дюйма. Края покрыты сгустковой лентой для безопасности животного. Эта процедура также требует наложения жгута, изготовленного с использованием шприца объемом 3 мл и длиной 0-2 нерассасывающегося шва, тройной мази с антибиотиком с тампоном, который будет использоваться в качестве водонепроницаемого барьера между кожей и каплей крови, машинки для стрижки волос, иглы 22 калибра для венепункции и гематокритной трубки для сбора крови.

Чтобы удержать мышь, поместите ее в трубку носом вперед. Затем аккуратно введите заднюю ногу в прорезь и стабилизируйте ее с помощью указательного и большого пальцев. Затем сбрейте волосы от боковой поверхности ноги от скакательного сустава до колена. Далее нанесите очень тонкий слой тройной мази с антибиотиком на безволосый участок. После этого наложите жгут как можно дальше краниально и затяните его. Подкожный сосуд, проходящий по внешней поверхности от колена до лодыжки, начнет заполняться и станет приподнятым, и его будет легче визуализировать.

Далее держите иглу 22 калибра прямо над кровеносным сосудом и перпендикулярно поверхности кожи. И проколоть сосуд, стараясь не вводить иглу слишком глубоко и не проколоть мышцу или кость. Кровь будет стекать на поверхность ноги для сбора в гематокритическую трубку. После того, как кровь будет собрана, ослабьте жгут и надавите на прокол для гемостаза. После того как кровотечение прекратится, извлеките животное из удерживающего устройства и верните его в клетку. Объемы, собранные с помощью этого метода, составляют от 10 до 150 ? L, в зависимости от частоты отбора проб. При этом качество образца варьируется, так как в нем могут содержаться санитарно-гигиенические продукты. В течение 24 часов следует брать не более 4 образцов крови из одной и той же ноги.

Наконец, мы узнаем, как собирать кровь из бедренной вены, что является еще одним вариантом сбора крови у крысы. Бедренная вена проходит по медиальной поверхности задней ноги от паха до коленного сустава, прежде чем пересечь колено и стать латеральной подкожной веной, что делает ее легкодоступной.

Преимущество кровотечения из бедренной вены заключается в том, что больший объем легче собирается, чем из подкожной вены. Недостатком является то, что для этой процедуры, у животного, находящегося в сознании, требуется два человека. Оборудование, необходимое для этой процедуры, аналогично методу подкожной вены, за исключением того, что для него не требуется жгут, а предпочтительным удерживающим устройством является гибкий конус. Чтобы выбрать правильный конус, измерьте его по отношению к длине тела животного, а затем сделайте овальное отверстие, вырезанное на уровне бедра.

Чтобы удержать животное, поместите его в трубку носом вперед. Затем сложите конец конуса и закройте его с помощью небольшого зажима, чтобы животное не вышло. Теперь протяните заднюю ногу через овальное отверстие, чтобы получить доступ к бедренной вене. Не хватайте слишком сильно, так как это может усугубить образование гематомы. Далее сбривают внутреннюю поверхность ноги от паха до колена, а на безволосую область наносят тонким слоем тройную мазь с антибиотиком. Затем удерживающий лицо должно окклюзировать бедренную вену и захватить крысу внутренней поверхностью ноги лицом к человеку, у которого будет выделяться кровь. Держа иглу 22-го калибра перпендикулярно кровеносному сосуду, непосредственно проколите вену и соберите кровь в гематокритные пробирки по мере того, как она попадает на поверхность кожи. Прокол должен быть как можно ближе к колену, чтобы в будущем можно было взять пробу перед этим местом. Также следите за тем, чтобы глубина прокола была не глубже длины скоса иглы. Чтобы помочь кровотоку, расположите крысу ногой ниже сердца. Наконец, ослабьте давление на ногу и надавите на место прокола, чтобы добиться гемостаза и предотвратить чрезмерную кровопотерю. Обратите внимание, что с помощью этой процедуры можно собрать значительно большее количество крови.

После обсуждения основ методов забора крови давайте рассмотрим несколько примеров того, почему эти процедуры могут быть полезны для научных исследований

Кровь часто анализируется для подтверждения иммунного ответа во время разработки вакцины. Здесь исследователи доставили пептидную вакцину животным, страдающим раком мочевого пузыря. Затем они собрали кровь через подчелюстную вену и разделили сыворотку, чтобы определить уровни различных цитокинов, которые служат индикаторами эффективности вакцины.

Забор крови также обычно проводится для проверки эффективности лечения путем изучения биомаркеров заболевания человека, таких как уровень глюкозы при диабете. Эти исследователи были заинтересованы в проверке эффективности новой генной терапии, доставляемой через хвостовую вену у животных с диабетом. После инъекции эти исследователи собирали кровь из подкожной вены в несколько временных точек, чтобы проанализировать влияние различных протоколов лечения на уровень глюкозы в крови.

Наконец, для некоторых экспериментов важно знать основное состояние животного, например, уровень воспаления или стресса. В этом примере плазма крови была собрана у крысы до и после стрессового события. И, как вы можете видеть, уровень кортикостерона, или гормона стресса, выше у животных через десять минут после стрессового события.

Вы только что посмотрели вторую часть JoVE о методах забора крови у мышей и крыс. После просмотра обоих этих видео вы должны лучше понять соображения и процедуры сбора крови у этих животных, а также то, как они используются в биомедицинских исследованиях сегодня. Как всегда, спасибо за просмотр!