5.7: Применение компаунда II

1. Местное применение

1. Перед нанесением любых мазей и кремов удалите всю шерсть с участка с помощью крема для депиляции или путем бритья.
2. Тщательно очистите и высушите кожу.
3. Нанесите вещество непосредственно на кожу с помощью аппликатора с ватным наконечником или с помощью непосредственно расположенной капли, чтобы избежать контакта со специалистом.
4. Для достижения наилучших результатов нанесите мазь или крем несколькими тонкими слоями, а не однократным нанесением толстым слоем.
5. Нанесите жидкость, разделав волосы на пробор и нанеся каплю на открытые участки кожи.
6. При местном применении вещества существует вероятность системной абсорбции из-за того, что животное ухаживает за этой областью. Следует принимать профилактические меры, чтобы избежать случайного проглатывания или преждевременного выведения вещества. Небольшие ошейники или щитки доступны для предотвращения того, чтобы животное дотянулось до пораженных частей тела. Также может потребоваться индивидуальное содержание, чтобы предотвратить выделение соседей по клетке.

Рисунок 1. Местное применение у мышей.

2. Пероральное дозирование

1. При подаче компаундов животным в виде корма или воды необходимо рассчитать минимальную суточную дозу, основанную на массе тела. Средний вес мыши или крысы, используемой в эксперименте, может быть использован для расчетов, если только не указано, что каждое животное должно быть взвешено и доза рассчитана для каждой особи.
2. В соответствии с протоколами, требующими точного измерения потребления пищи и/или воды, животные должны содержаться отдельно.
3. Для удовлетворения экспериментальных потребностей могут быть изготовлены специализированные корма или лакомства.
   1. Замените стандартный рацион на сформулированный, который позволяет животным принимать соединение внутрь в течение дня.
   2. Корм может нуждаться в замене чаще, чем обычный корм, из-за нестабильности соединения.
4. Вещества также могут вводиться путем растворения их в питьевой воде, что позволяет животным получать соединение в течение дня
   1. В воду добавляют небольшое количество сахара, чтобы она была вкусной. Точное количество воды для добавления определяется принятием воды мышами. Используйте как можно меньший шаг.
   2. Частота подмены воды зависит от стабильности состава. Некоторые вещества могут быть светочувствительными или со временем выпадать в осадок.

3. Процедура зондажа

20-25 калибра x 1,5 в прямых или изогнутых дозирующих иглах используются для мышей. Для крыс используются иглы 18-20 калибра х 2-3 в прямых или изогнутых дозирующих иглах. Они доступны в виде многоразовых игл из нержавеющей стали или в виде одноразовых игл. Одноразовые иглы могут иметь металлический или гибкий пластиковый стержень с силиконовым наконечником.

1. Прикрепите дозирующую иглу к шприцу, выбранному в зависимости от объема и вязкости исследуемого раствора. Для дозирования густых жидкостей предпочтительнее использовать шприц с замком Люэра. Они обычно доступны, начиная с размера 3 куб. см с градуировкой 100 μl. Это может не подходить для небольших объемов или когда есть необходимость в точных объемах с меньшим шагом.
2. Прикрепите шприц к игле таким образом, чтобы градуировки на стволе можно было считывать, не поворачивая иглу. После того, как игла была помещена в пищевод, любое вращение может разорвать пищевод, что приведет к смерти животного.
3. Наполните шприц соответствующим объемом вводимого препарата (оптимальный объем = 5 мл/кг и максимальный объем = 20 мл/кг)⁴
4. Для этой процедуры необходимо надлежащее удержание. ⁷
   1. Вручную удерживайте мышей, захватывая кожу у основания головы и загривая их. Важно, чтобы тело держалось так, чтобы оно было подвешено по прямой линии от головы к хвосту. Любое скручивание тела будет препятствовать введению иглы в пищевод.
   2. Крепко возьмитесь за загривок так, чтобы голова имела минимальное движение из стороны в сторону. Задние конечности должны быть стабилизированы, чтобы предотвратить вращение тела.
   3. Для гавагирования крысы обхватите ее за плечи, используя указательный и средний пальцы с каждой стороны шеи, и ладонь на спине животного. Большой, третий и четвертый пальцы должны обхватывать грудную клетку, чтобы животное не могло двигаться вперед или назад. Расположение пальцев с каждой стороны шеи не позволяет крысе поворачивать голову.
   4. Важно, чтобы тело находилось по прямой линии и не перекручивалось, чтобы помочь в размещении иглы для зондажа без повреждения рта, глотки, пищевода или желудка.
   5. Следите за тем, чтобы голова не имела лишних движений из стороны в сторону.
   6. Задние конечности могут быть стабилизированы для предотвращения вращения тела. Это достигается за счет того, что задние ноги могут опираться на столешницу или столешницу клетки.
5. Способ применения вещества
   1. Расположите иглу изгибом вниз и на одной линии с естественным изгибом шеи. Введите иглу в рот с правой или левой стороны, между резцами и коренными зубами под углом к задней части глотки.
   2. Как только игла окажется в ротовой полости, наклоните голову назад с помощью иглы для зондажа до тех пор, пока нос не будет направлен вверх. Особенно это важно при использовании прямых игл. Игла должна легко скользить в пищевод. Не опускайте иглу с усилием. Если вы чувствуете какое-либо сопротивление, вытащите иглу и повторите попытку.
   3. Как только игла окажется в животе, аккуратно внесите состав.
   4. Извлеките иглу, следя за тем, чтобы не происходило вращения изогнутой иглы.
   5. Если животное начинает сопротивляться, извлеките дозирующую иглу и зафиксируйте животное более надежно.
   6. Во время процедуры, если у животного проявляются признаки цианоза или дыхательной недостаточности, или если изо рта вытекает раствор, дозирующую иглу следует немедленно удалить и выпустить животное в клетку.
   7. В целом, при обрабатывании крыс и мышей, особенно едким веществом, рекомендуется сначала вводить небольшое количество жидкости – для проверки на кашель – до того, как будет введен весь объем. Таким образом, если игла расположена неправильно, объем, доставляемый в легкие, будет небольшим, и у животного будет больше шансов на выздоровление.

Рисунок 2. Оральный зонд у мышей (слева) и крыс (справа).

Многие эксперименты требуют, чтобы соединение вводилось животному перорально или местно, чтобы метод лучше имитировал естественное поступление экспериментального вещества.

Для перорального приема соединение можно растворять в питьевой воде или добавлять в пищу, которую потребляют животные. Другим, более точным методом перорального дозирования является пероральный зонд, при котором с помощью большой иглы соединение вводится непосредственно в желудок. С другой стороны, средство для местного применения может быть нанесено непосредственно на поверхность кожи и, как правило, предназначено для воздействия только на область, на которую оно наносится. Каждая из этих стратегий имеет свои преимущества и ограничения, о которых мы поговорим в этом видео. После этого мы продемонстрируем, как выполнять эти методы введения соединений на лабораторных животных, а также некоторые из их применений.

Прежде чем углубиться в протоколы, давайте рассмотрим соображения, преимущества и недостатки этих методов. Пероральное дозирование таблеток, капсул или жидкости является наиболее часто используемым методом введения лекарств у людей. Тем не менее, таблетки и капсулы непрактичны для грызунов, поэтому обычное пероральное дозирование достигается путем растворения соединения в питьевой воде или пище.

При дозировании через питьевую воду в воду часто добавляют сахарозу для улучшения вкусовых качеств. Тем не менее, он должен быть тонко сбалансирован, чтобы способствовать нормальному потреблению воды и не чрезмерному употреблению из-за сладкого вкуса. Хорошее правило – начинать с 10% раствора сахарозы, а затем корректировать в зависимости от приема. Еще один способ перорального введения дозы животному – через специализированный корм. Существует коммерчески доступный корм, в состав которого входят обычно дозированные соединения, такие как фенбендазол. Компании, производящие корма для грызунов, также могут создавать специализированные тестовые рационы для удовлетворения экспериментальных требований.

Преимущества этой формы перорального дозирования заключаются в том, что она неинвазивна, вводит соединение непрерывно и имитирует пероральное введение лекарственного препарата человеком. Тем не менее, ему не хватает точности, потому что потребление компаунда зависит от приема пищи или воды, стабильности компаунда и количества животных, присутствующих в клетке. Если точное дозирование не имеет критического значения для эксперимента, этот неинвазивный метод лучше всего подходит для благополучия животных.

Для более точного перорального приема можно использовать пероральный зонд, который откладывает соединение непосредственно в желудок в определенное время и в указанном объеме. Однако для выполнения этой техники требуется надлежащая подготовка, потому что если их не удерживать должным образом, у животного может произойти серьезное повреждение.

Что касается средств местного действия, то к ним относятся кремы, лосьоны, мази, спреи и гели. Как правило, средства местного применения предназначены для воздействия только на ту область, на которую они наносятся. Тем не менее, они также могут всасываться в кровоток, что может быть преднамеренным или непреднамеренным. Эта абсорбция зависит от: состояния кожи, используемой площади поверхности, концентрации вещества, продолжительности контакта и растворимости в липидах вещества.

Теперь, когда мы рассмотрели предысторию пероральных и местных методов введения, давайте узнаем протоколы, начиная с перорального введения с кормом или водой.

Для расчета дозировки сначала необходимо знать предполагаемую дозу, которую необходимо вводить. Во-вторых, вы должны определить массу тела. Если не указано иное, вместо взвешивания отдельных животных вы можете использовать средний вес мыши или штамма крысы для расчетов. В-третьих, вы должны быть в курсе количества животных в клетке, а в-четвертых, вам нужно знать среднесуточное потребление воды или пищи на одну клетку.

Помните, что приготовленный корм или питьевая вода с растворенным соединением могут нуждаться в замене чаще, чем стандартный корм или вода, из-за нестабильности состава. Некоторые соединения могут быть светочувствительными или со временем выпадать в осадок.

Теперь давайте узнаем, как перорально вводить точные дозы, выполняя пероральный зондометр у мышей и крыс.

Первым делом необходимо выбрать подходящую иглу для проведения процедуры. Они бывают либо многоразовыми, изготовленными из нержавеющей стали, либо одноразовыми с гибким пластиковым стержнем и силиконовым наконечником. Для мышей подходят прямые или изогнутые дозирующие иглы 20-25 калибра длиной 1,5 дюйма. Для крыс выбирайте прямые или изогнутые дозирующие иглы 18-20 калибра длиной 2-3 дюйма. Правильный выбор иглы и шприца также зависит от объема и вязкости. Просмотрите видео Compound Administration I, чтобы понять влияние этих факторов. Для дозирования густых жидкостей предпочтительнее использовать шприц с замком Люэра.

После выбора прикрепите шприц к игле таким образом, чтобы градуировки на стволе можно было прочитать без поворота иглы. Это важно, так как после того, как игла была введена в пищевод, любое вращение может разорвать стенку пищевода, что приведет к смерти животного. Затем наполните шприц правильным объемом вводимого раствора.

Этот метод всегда следует выполнять на животных в сознании с неповрежденными глотательными рефлексами, чтобы предотвратить случайное попадание в трахею. Использование правильной техники удержания имеет решающее значение для этой процедуры. Для мыши возьмите кожу у основания головы и крепко держите загривок. Это гарантирует, что голова имеет минимальную возможность для движений из стороны в сторону. Также следите за тем, чтобы тело было подвешено по прямой линии от головы к хвосту; Любое перекручивание будет препятствовать введению иглы в пищевод. Задние конечности также должны быть стабилизированы, чтобы предотвратить вращение тела.

Чтобы удержать крысу, обхватите ее за плечи, используя указательный и средний пальцы с каждой стороны шеи. Это не позволит крысе поворачивать голову из стороны в сторону. Большой, третий и четвертый пальцы обхватывают грудь, чтобы животное не двигалось вперед или назад.

После того, как вы правильно удерживаете животное, расположите иглу изгибом вниз и на одной линии с естественным изгибом шеи. Затем введите иглу в рот с правой или левой стороны, через диастематы и между резцами и коренными зубами под углом к задней части глотки. Теперь, когда игла помещена в ротовую полость, с ее помощью наклоните голову назад, пока нос не будет направлен вверх. В этот момент игла должна легко скользить в пищевод. После того, как игла будет размещена в желудке, аккуратно внесите состав. Затем извлеките иглу из животного, следя за тем, чтобы не вращать ее. Важно НЕ опускать иглу вниз с силой. Если вы чувствуете какое-либо сопротивление, устраните его и повторите попытку. Во время процедуры, если у животного проявляются признаки цианоза или дыхательного дистресса, или если изо рта вытекает раствор, дозирующую иглу следует немедленно удалить и выпустить животное в клетку.

Наконец, давайте рассмотрим процедуры местного применения у лабораторных животных. Начните с обезболивания животного. Обычно это делается с помощью быстродействующего ингалянта, который позволяет животному быстро восстановиться. Для получения более подробной информации о введении анестезии, пожалуйста, посмотрите другое видео из этой коллекции.

Далее с помощью машинки для стрижки волос удалите весь мех с области нанесения. Чтобы избежать порезов, приложите плоскую поверхность машинки для стрижки к коже и брейтесь в направлении, противоположном направлению роста волос. Затем промойте кожу водой и высушите ее марлевым салфеткой. Теперь с помощью аппликатора с ватным наконечником нанесите вещество непосредственно на кожу. Для достижения наилучшего результата наносите мазь или крем несколькими тонкими слоями, в отличие от одноразового нанесения толстым слоем. Чтобы предотвратить случайное проглатывание местного состава в связи с грумингом, наденьте небольшой ошейник или щиток, чтобы животное не дотянулось до пораженной части тела. Кроме того, чтобы предотвратить аллогруминг со стороны соседей по клетке, животных следует размещать отдельно.

Теперь, когда у вас есть представление об этих альтернативных путях введения, давайте посмотрим, как они используются в биомедицинских исследованиях сегодня.

Одним из важных применений перорального зонда является точное введение веществ для изучения их прямого влияния на желудочно-кишечный тракт. Здесь исследователи использовали этот метод для доставки преобразованных пробиотических дрожжей непосредственно в желудок животного. А затем они препарировали пейеровы пятна, которые представляют собой организованные лимфатические узелки из тонкой кишки, чтобы изучить адгезию доставленного микроорганизма.

Неинвазивный оральный путь может быть использован для имитации естественного способа развития инфекции пищевого происхождения. В этом эксперименте ученый разработал модель пероральной передачи Listeria monocytogenes у мышей через употребление зараженной пищи. После заражения исследователи извлекали различные органы, такие как тонкая кишка, толстая кишка, селезенка, печень и желчный пузырь, чтобы проанализировать распространение инфекции на эти ткани.

Наконец, некоторые исследователи заинтересованы в изучении механизма, с помощью которого ультрафиолетовое излучение может привести к солнечным ожогам. Здесь ученые использовали местный способ применения фармакологического вещества, которое индуцирует выработку эпидермального меланина – УФ-защитного агента. После этого они использовали протокол, аналогичный исследованиям на людях, для изучения защитного эффекта местного препарата против эритемы, вызванной ультрафиолетовым излучением.

Вы только что посмотрели вторую статью JoVE о методах введения составных соединений, посвященных пероральному и местному применению. Теперь вы должны понять, как можно перорально дозировать животное с помощью корма или воды, и как можно выполнять более точное пероральное введение зондажа. Наконец, вы должны знать соображения и методы местного применения, а также применение этих различных методов. Как всегда, спасибо за просмотр!