Препарирование имагинальных дисков с 3-го личинки дрозофилы Инстар

Сегодня я покажу вам, как препарировать имагинальные диски у личинок дрозофилы третьего возраста. Личиночные диски третьего возраста могут быть использованы для ряда процессов развития. Мы смотрим на них в нашей лаборатории, чтобы увидеть процесс апоптоза, но вы можете экспрессировать в них различные белки и изучать их таким образом, и видеть все виды процессов развития, происходящих внутри дисков по порядку.

Чтобы сделать это, я собираюсь использовать несколько очень важных инструментов. Во-первых, это палочка, с помощью которой мы будем вынимать личинок из их посуды. Далее, очень важным является рассекающий щипцы, которые должны быть чрезвычайно острыми, чтобы произошло рассечение.

Затем мы будем использовать хирургическое лезвие, хирургическое лезвие номер 11, чтобы удалить диски из головы. А затем мы разместим диски на предметном стекле с векторным экраном в качестве монтажного материала. Итак, первое, что мы собираемся сделать, это собрать третью и звездную блуждающую, третью и звездчатую личинки.

Я просто использую свою палочку, чтобы как бы оторвать их от края флакона. Иногда помогает, если ваша палочка немного влажная, а затем положите их в каплю PBS. Итак, у нас есть третья звездчатая личинка.

Поскольку я правша, я поверну его голову вправо, и мы будем использовать пару ориентиров, чтобы понять, где его схватить. Первая – это основная часть трахеи здесь и здесь. И затем есть небольшое поперечное сечение здесь, в направлении головы.

Итак, сначала я собираюсь аккуратно захватить личинок примерно на две трети пути вниз по телу от головы. А затем я собираюсь захватить правой рукой несколько миллиметров позади крестовины, пытаясь пройти примерно половину ширины личинок. Так что это довольно хорошее понимание.

Вы можете видеть, что я уже на полпути. Так что потом я буду аккуратно тянуть правой рукой вперед, вижу все выходящие туда кишки. Хорошо. Основную часть тела теперь можно выбросить.

И здесь у нас есть голова, которая включает в себя имагинальные диски, прикрепленные к ротовым частям. Поэтому я собираюсь схватить его за ротовую часть, чтобы не раздавить ни один из дисков, и переместить его к свежей точке PBS. Итак, теперь у нас есть фиксированная голова личинки.

Мы собираемся удалить всю лишнюю ткань и либо захватить личинку за мундштуки, как раньше, либо прижать ее щипцами к препарирующей пластине. Мундштуки теперь находятся слева. Итак, вот у нас есть кишечник, который нам не нужен, и есть слюнная железа.

Есть какое-то толстое тело или толстое тело. Просто продолжайте оттягивать, особенно жир, который может помешать некоторым анализам и испачкать все, что вам не нужно. Итак, теперь у нас есть очищенная голова личинки.

Итак, теперь у нас есть наши личиночные головы, которые были вскрыты от тела, зафиксированы и промыты, посторонние ткани удалены, и они были обработаны тем, что им нужно было обработать, что может быть пятном антител в С-2-туннеле или другим функциональным окрашиванием. И теперь мы поместили их на предметное стекло и готовы препарировать настоящие диски вдали от головки. Ротовые части.

Итак, на этот раз наши ротовые части здесь слева. Я возьму щипцы и просто прижму их к предметному стеклу. На правой руке у меня лезвие скальпеля номер 11, которое также является немного более тонким инструментом для препарирования.

Итак, сначала я собираюсь удалить ЦНС и зрительные доли. И вы видите, вот ЦНС, вот две оптические доли, а вот прикрепленные к ним диски глазных антенн. Итак, если я удаляю ЦНС, вставляя лезвие между зрительными долями и глазными дисками и медленно потягивая, глазные диски как бы растягиваются там.

Итак, у нас есть ЦНС и оптические доли. Итак, теперь у нас есть два диска глаза и глаза, которые были отделены от ЦНС. Теперь я собираюсь убрать их с ротовых частей, просто аккуратно разрезав и потянув за основание.

Итак, есть один диск антенны глаза, другой диск глаза. Хорошо. И теперь мы видим торчащий здесь диск крыла. Я собираюсь, опять же, аккуратно найти вырез основания и потянуть.

Итак, у нас есть диск крыла и диск для ног, прикрепленный к нему, а также немного трахеи. Итак, у вас есть диск для крыльев с прикрепленным диском для ног, и, очевидно, есть несколько дисков для ног. Так что мы можем, мы можем поискать здесь и найти больше дисков, просто осторожно прощупывая лезвием.

Вот и все диски, которые мы найдем в этом альбоме. Есть еще пара дисков для ног.