ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Сэмюэл Л. Пфафф является профессором в лаборатории экспрессии генов в Солка института биологических исследований и следователь в Медицинского института Говарда Хьюза. Эта работа была поддержана Кристофера и Даны Рив Foundation. Джо Belcovson, Кент Schnoeker и Майк Салливан в мультимедийных ресурсов в Институте Солка оказана помощь с фотографией и редактирования.

1. Подготовка искусственной цереброспинальной жидкости (aCSF) 1. Мы сначала подготовить 2 л 10X запас aCSF без магния и кальция. Реагенты, перечисленные в миллимолярных. Каталог цифры относятся к Sigma / Aldrich. <table border="1" cellpadding="0"><tbody><tr><td colspan="4"> 2 литра 10X aCSF (без Mg или Ca) </td></tr><tr><td> Реагент </td><td> мМ </td><td> g/2L </td><td> Каталог </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 40 </td><td> 5,96 </td><td> P-9333 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 1280 </td><td> 149,61 </td><td> S-7653 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 210 </td><td> 35,28 </td><td> S-6297 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 5 </td><td> 1,38 </td><td> S-9638 </td></tr><tr><td> Глюкоза </td><td> 300 </td><td> 108,12 </td><td> D-9434 </td></tr><tr><td colspan="4"> Добавить дистиллированной водой до 2 л </td></tr></tbody></table> Мы также будем готовить 1М растворов MgSO 4 и CaCl 2 в 50 мл воды, чтобы обеспечить корректировку молярность от эксперимента к эксперименту и обеспечить кальция остается в растворе. <table border="1" cellpadding="0"><tbody><tr><td colspan="4"> 1M кальция и магния Акции </td></tr><tr><td> Реагент </td><td> М </td><td> g/50mL </td><td> Каталог </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> 1 </td><td> 7,35 </td><td> C-5080 </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> 1 </td><td> 12,33 </td><td> M-5921 </td></tr></tbody></table> Решение aCSF должны быть отравлены газом с карбогена (95% О2 / 5% СО2), чтобы снизить рН перед добавлением кальция или кальция будет выпадать в осадок. <table border="1" cellpadding="0"><tbody><tr><td colspan="2"> 1 литр aCSF </td></tr><tr><td> Реагент </td><td> Объем </td></tr><tr><td> 10X aCSF </td><td> 100 мл </td></tr><tr><td> 1М CaCl 2 </td><td> 1 мл (рассечение) 2 мл (запись) </td></tr><tr><td> 1M MgSO 4 </td><td> 1 мл </td></tr><tr><td colspan="2"> Добавить ~ 800 мл дистиллированной воды, газа с карбогена в течение 2 минут перед добавлением кальция </td></tr><tr><td colspan="2"> Добавить дистиллированной водой до 1 л. </td></tr></tbody></table> Насосы и насосно-компрессорные и рассекает блюда должны быть промыты до и после использования. Рассечение Хотя рассекает, 1мМ кальция aCSF следует постоянно газом с карбогена. ACSF можно перекачать из бутылки рассекает блюдо и перекачивается из рассекает блюдо к бутылке или отправлены в отходы. Мы используем эластомер (Sylgard, Dow Corning), покрытых блюдо выполнить рассечение. Новорожденных мышей быстро обезглавленный с острыми ножницами и разрез, сделанный с помощью ножниц по вентральной грудной клетки и живота. Животное тогда потрошился. Потрошился мыши промывается aCSF. Животное тогда возлагали на вскрытии блюдо с насекомыми контактов вводится через передние конечности и у основания хвоста. Позвоночника снимается, выполняя вентральной ламинэктомия. Позвоночника проводится с небольшими щипцами и один лезвие маленькие ножницы вставляется спины сразу костлявые позвоночника. Пластинки разрезается на одной стороне, а затем другие, мягко подъема костлявые позвоночника. Это осуществляется по длине позвоночника. Спинного мозга удаляется путем разрезания вдоль обеих сторон спинного мозга разорвать корешки спинномозговых нервов и сократить мозговых оболочек окружающих спинной мозг. Режем на левой и правой сторон, то мы сократим мозговые оболочки прикреплен к спинной стороне спинного мозга, чтобы освободить его. Изолированных шнур затем возлагали на блюдо рядом с входом aCSF для обеспечения хорошей оксигенации, если дополнительные животные расчленены. Изолированных спинного мозга, затем переведен в записи блюдо с помощью небольшого ложкой или лопаточкой. Здесь мы заливать препарат с кислородом кальция 2 мМ aCSF. Спинной мозг прижат к эластомера покрытием блюдо и микроманипуляторами используются для перемещения внеклеточной, целые электродов всасывания корневого возле корней. Когда электрод находится вблизи свободного конца корня, нежное всасывание применяется привлечь внедряются в всасывающего электрода. Этот процесс может быть повторен для записи несколько корней одновременно. <img src="/files/ftp_upload/1660/1660fig1.jpg" alt="Рисунок 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 1"> Рисунок 1. Обезглавливание и Evisceration. A. Быстро обезглавить мышь с острыми ножницами. Больше или меньше взносов ствола мозга может быть достигнуто в зависимости от уровня среза. B. Место один лезвие ножниц в отверстие грудной полости созданные обезглавливание. Открытое вентральной грудной клетки и брюшной полости до основания хвоста. Удалите внутренности и промыть aCSF. <img src="/files/ftp_upload/1660/1660fig2.jpg" alt="Рисунок 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 2"> Рисунок 2. Удаление позвоночника. A. Вставьте левый лезвие ножниц в пространство между позвоночника и спинного мозга справа от спинного мозга и прорезают кости прокладки брюшной части мозга. Затем вставьте право лезвие ножниц в пространство между позвоночника и спинного мозга, слева от спинного мозга и разреза. Б. Повторите эту процедуру при применении нежной тяги к позвоночнику. Будьте осторожны, не прокол спинного мозга, держа ножницы под небольшим углом. <img src="/files/ftp_upload/1660/1660fig3.jpg" alt="Рисунок 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 3"> Рисунок 3. Удаление спинного мозга. A. Вставьте левый лезвие ножниц в пространство между спинным мозгом и кости справа от спинного мозга и прорезать корешков спинного мозга и мозговых оболочек прокладки сбоку от мозга. Затем вставьте право лезвие ножниц в пространство между спинным мозгом и кости слева от спинного мозга и прорезать корешков спинного мозга и мозговых оболочек прокладки сбоку от мозга. B. Наконец, осторожно поднимите ростральной мозга и мозговых оболочек вырезать подключения спинной мозг к пластинок. Снова старайтесь не прокол спинного мозга, держа ножницы под небольшим углом. Ничего не вырезано корни слишком близко к спинному мозгу.

<ol><li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Goulding, M., Pfaff, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+circuits+that+generate+simple+rhythmic+behaviors+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Development of circuits that generate simple rhythmic behaviors in vertebrates.</a> Curr Opin Neurobiol. 15 (1), 14-20 (2005).</li>
<li>Gallarda, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, (2008).</li>
<li>Gosgnach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((V1+spinal+neurons+regulate+the+speed+of+vertebrate+locomotor+outputs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">V1 spinal neurons regulate the speed of vertebrate locomotor outputs.</a> Nature. 440 (7081), 215-219 (2006).</li>
<li>Lanuza, G. M., Gosgnach, S., Pierani, A., Jessell, T. M., Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+identification+of+spinal+interneurons+that+coordinate+left-right+locomotor+activity+necessary+for+walking+movements%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic identification of spinal interneurons that coordinate left-right locomotor activity necessary for walking movements.</a> Neuron. 42 (3), 375-386 (2004).</li>
<li>Jiang, Z., Carlin, K. P., Brownstone, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+functionally+mature+mouse+spinal+cord+preparation+for+the+study+of+spinal+motor+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">An in vitro functionally mature mouse spinal cord preparation for the study of spinal motor networks.</a> Brain Res. 816 (2), 493-499 (1999).</li>
<li>Ziskind-Conhaim, L., Gao, B. X., Hinckley, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethanol+dual+modulatory+actions+on+spontaneous+postsynaptic+currents+in+spinal+motoneurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Ethanol dual modulatory actions on spontaneous postsynaptic currents in spinal motoneurons.</a> J Neurophysiol. 89 (2), 806-813 (2003).</li>
<li>Tabak, J., Rinzel, J., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+activity-dependent+network+depression+in+the+expression+and+self-regulation+of+spontaneous+activity+in+the+developing+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The role of activity-dependent network depression in the expression and self-regulation of spontaneous activity in the developing spinal cord.</a> J Neurosci. 21 (22), 8966-8978 (2001).</li>
<li>Chub, N., Mentis, G. Z., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloride-sensitive+MEQ+fluorescence+in+chick+embryo+motoneurons+following+manipulations+of+chloride+and+during+spontaneous+network+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Chloride-sensitive MEQ fluorescence in chick embryo motoneurons following manipulations of chloride and during spontaneous network activity.</a> J Neurophysiol. 95 (1), 323-330 (2006).</li>
</ol>

Animal Care<br /&gt;<br /&gt; Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Солка института биологических исследований AIACUC.

Изолированных новорожденных спинного мозга обеспечивает послушный метод изучения нервной системы развитию1, 2. В поясничного спинного мозга у новорожденных грызунов, центральный схемы генерации картина может производить фиктивные передвижения в присутствии медиаторов. Это фиктивный передвижения состоит из ритмических увеличение активности, всплески, которые производятся на 0,2 до 0,5 Гц. Эти всплески организованной производить влево-вправо чередования по длине шнура и сгибателей-разгибателей чередование (ипсилатеральног...

<table><tbody><tr><td>KCl</td><td></td><td>P-9333</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td>S-7653</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>S-6297</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>S-9638</td><td></td></tr><tr><td>Глюкоза</td><td></td><td>D-9434</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>C-5080</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>M-5921</td><td></td></tr><tr><td>Большие ножницы</td><td>Fine Science Tools</td><td>14070-12</td><td></td></tr><tr><td>Пинцет</td><td>Fine Science Tools</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>Малые ножницы</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Энтомологические булавки</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 (Dow-Corning)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Мерная колба на 1L</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Мерная колба на 100mL</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Спинной мозг электрофизиологии

Spinal Cord Electrophysiology

Новорожденных мышей спинного мозга представляет собой модель для изучения развития нейронных схемотехника и опорно-двигательного движения. Мы показываем, спинного мозга и рассечение подготовке записи ванны искусственного спинномозговой жидкости используются для опорно-двигательного исследований. После рассеченные, спинного мозга вентральной нервных корешков может быть присоединен к записи электродов для записи электрофизиологических сигналов центральной схемы создания картины в поясничном мозга.

Демонстрация изоляции новорожденных мышей спинного мозга для электрофизиологических исследований.

Спинной мозг новорожденной мыши является моделью для изучения развития нейронных цепей и локомоторных функций. Мы демонстрируем спинной мозг...

Здравствуйте, меня зовут Алан Мейер, я научный сотрудник лаборатории faf в Институте Солка. Сегодня я покажу вам, как выполнить вентральную ламинэктомию для выделения спинного мозга мыши, а также то, как закрепить спинной мозг на электроде для регистрации его нейронной активности. Вам потребуется подготовить два раствора для спинного мозга: один для диссекции, другой — для recording bath.Единственным различием между двумя растворами будет концентрация хлорида кальция. Сначала вам потребуется приготовить 10-кратный стоковый раствор A-C-S-F. Для этого понадобятся перечисленные ниже реагенты.Начните с добавления 100 миллилитров 10 X-A-C-S-F в мерную колбу объемом один литр. Затем долейте в колбу воду, оставив некоторое пространство, чтобы раствор не перелился. При насыщении газом используют растворы с концентрацией газов 5%CO2 и 95%O2.Для снижения pH и оксигенации раствора добавьте 1 мл 1 М сульфата магния. Затем добавьте 1 мл 1 М раствора хлорида кальция в раствор для диссекции и 2 мл 1 М хлорида кальция в раствор для регистрации. В данных экспериментах могут быть использованы мыши в возрасте от E 16.5 до P 4.Начните вскрытие мыши, сначала быстро обезглавив её острыми ножницами. Затем сделайте разрез вдоль вентральной срединной линии до самого хвоста. После этого с помощью пинцета удалите внутренние органы мыши и промойте полость раствором A CSF.Для проведения диссекции используйте 1 мМ раствор хлорида кальция A CSF. Поместите мышь в чашку для диссекции и зафиксируйте ее, установив булавки у четырех лап и у основания хвоста. Целью данного этапа будет выделение спинного мозга путем разреза вдоль красной пунктирной линии, что позволит отделить спинной столб от пластинок, окружающих спинной мозг.Это позволит вам обнажить спинной мозг. Затем проведите разрез вдоль линии, чтобы удалить мозговые оболочки и спинномозговые корешки, освобождая спинной мозг. Найдите спинной столб; одной рукой с помощью пинцета крепко зажмите спинной столб, а другой возьмите маленькие ножницы.Для извлечения спинного мозга держите ножницы под низким углом. Чтобы не повредить спинной мозг кончиками ножниц, теперь мы приступим к его препарированию. Следуя вдоль красной линии, разрежьте мозговые оболочки и спинномозговые корешки.Для извлечения спинного мозга можно сделать разрезы по обеим сторонам от него, а затем разрезать по вентральной срединной линии. Важно держать ножницы под низким углом, чтобы не проколоть спинной мозг. Также следует избегать слишком близкого к спинному мозгу отсечения корешков.Затем перенесите спинной мозг в регистрирующую ванну и подсоедините электроды к спинномозговым корешкам. Расположите электрод рядом с корешком. После этого с помощью вакуума осторожно втяните нерв в электрод.Благодарим за просмотр. Надеемся, что это видео будет полезным в ваших будущих экспериментах.

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Демонстрация изготовления и использования внеклеточных электродов всасывания используется для измерения электрофизиологических записей новорожденных грызунов спинного...

Спинной мозг электрофизиологии II: внеклеточной изготовление электродов Всасывающая

Видео демонстрирует функциональную регенерацию проприоспинальных соединений с использованием анализа на основе многоэлектродной матрицы (MEA). Срезы спинного мозга помещаются на MEA и позволяют срастись. Сросшиеся срезы механически разделяются, создавая поражение, заставляя проприоспинальные нейроны расти над очагом поражения и соединять срезы. Электрическая активность срезов оценивается для выявления регенерации функциональных соединений.

Изучение регенерации функциональных связей между срезами спинного мозга с помощью многоэлектродной матрицы

В этом видео представлены электрофизиологические записи из органотипических культур срезов спинного мозга, снятые с помощью многоэлектродной матрицы или устройства MEA. Эти записи оценивают регенерацию нейронов между срезами. Наблюдаемая синхронизированная электрическая активность подтверждает успешную регенерацию нейронов.

Электрофизиологические записи для оценки регенерации нейронов в сокультурных срезах спинного мозга

ГАМКергических пресинаптического торможения является мощным ингибирующим механизм в спинном мозге важной для двигателя и интеграции сенсорного сигнала в спинного мозга сетей. Базовая первичных афферентных деполяризация может быть измерена путем записи дорзальных корешков потенциалов (DRP). Здесь мы показываем, способ записи в естественных условиях DRP у мышей.

Измерение спинного пресинаптического торможения у мышей, спинных потенциального записи<em&gt; В Vivo</em

Центральный дыхательный аппарат расположен в стволе мозга. Спонтанный дыхательный моторный выход из изолированного ствола головного мозга и спинного мозга регистрируется путем размещения электрода на четвертом вентральном корешке. Этот экспериментальный подход ценен для фармакологических исследований или оценки респираторных проблем и генетических манипуляций с ритмичным моторным поведением.

Электрофизиологии на изолированные ствола мозга-спинного мозга Препараты из новорожденных Грызуны Позволяет нейронной сети Output дыхания запись

Здесь мы приводим протокол, основанный на срезах спинного мозга культивировали на нескольких матриц электродов для изучения функциональной регенерации проприоцептивных соединений в пробирке.

Исследуя функциональное Регенерация в Органотипической спинного мозга сопредседателей культур, выращенных на нескольких электродов массивов

Мы покажем, как подготовить косые срезы спинного мозга у молодых мышей. Этот препарат позволяет для стимуляции брюшных корней.

Получение Косой спинного мозга Ломтики для вентральных корешков стимуляции

Эта рукопись описывает методы электрофизиологических записей из спинномозговых нейронов полосатого данио эмбрионов и личинок. Препарат содержит нейроны на месте и часто включает в себя минимальное рассечение. Эти методы позволяют электрофизиологическому исследование различных нейронов спинного мозга, от первоначального приобретения электрической возбудимости через ранние личиночные стадии.

рерио<em&gt; В Ситу</em&gt; Спинной мозг Подготовка к Электрофизиологическим записям из спинномозговых сенсорных и двигательных нейронов

Описано совместное использование технологии микроэлектродных массивов и 4-аминопиридин-индуцированной химической стимуляции для исследования ноцицептивной активности на сетевом уровне в спинном роге спинного мозга.

Запись сетевой активности в спинальных ноцицептивных цепях с помощью микроэлектродных матриц

Этот протокол описывает метод с использованием патч-зажима для изучения электрических реакций двигательных нейронов на стимуляцию спинного мозга (SCS) с высоким пространственно-временным разрешением, который может помочь исследователям улучшить свои навыки в разделении спинного мозга и поддержании жизнеспособности клеток одновременно.

Подготовка ex vivo среза спинного мозга для регистрации цельноклеточного патча-зажима в двигательных нейронах при стимуляции спинного мозга

Мы описываем протокол для спинальной многоканальной внеклеточной записи наряду с регистрацией сердечной функции и анализом заблокированных сердечко спинальных нейронов дорсального рога. Этот метод предлагает синхронизированную во времени структуру для изучения спинальных механизмов, лежащих в основе висцеральных функциональных изменений грудной клетки, вызванных иглоукалыванием.

Изучение профилей кодирования соматической стимуляции на сердечные нейронные реакции в спинномозговом спинном роге крысы

Узнайте метод изоляции спинного мозга новорождённых мышей для электрофизиологических исследований с помощью вентральной ламинэктомии. Этот подход позволяет записывать нейронную активность и изучать механизмы работы нервной системы.

Спинной мозг электрофизиологии

Больше видео