22 января 2010 г.
Это видео показывает, как хирургическим путем препятствовать эндолимфатического проток морской свинки, чтобы произвести эндолимфатического водянка.
Здравствуйте, меня зовут Крис Эдден. Я исследователь из отделения отоларингологии, хирургии головы и шеи Университета Кейс Вестерн Резерв. Сегодня я опишу метод хирургической блокады эндолимфатического протока у морской свинки, которая вызывает эндолимфатический гидропс и используется для моделирования многих видов патологий уха, связанных с заболеваниями.
Лимфатический гидропс представляет собой отек эндолимфатического отдела улитки и является ключевым гистологическим маркером болезни Меньера. Здесь представлен поперечный срез нормальной улитки с двумя перилимфатическими пространствами — масштабирующей лестницей и барабанной лестницей, а также не расширенным средним лестничным ходом, который сообщается с эндолимфатическим протоком. Структура, с которой мы работаем: через несколько недель после хирургической процедуры средний лестничный ход расширяется, как показано здесь, а мембрана Рейснера растягивается. У животных также наблюдается прогрессирующая флуктуирующая потеря слуха на оперированном ухе.
Как и во многих других заболеваниях уха, хирургическое индуцирование гидропсии у морских свинок является «золотым стандартом» животной модели болезни Меньера у человека с момента ее первого описания Робертом Кором и Гарольдом Шнеком в 1965 году. Хотя изначально процедура выполнялась с использованием более инвазивного интрадурального доступа, в нашем центре предпочитают экстрадуральный доступ, поскольку он приводит к меньшему уровню заболеваемости и смертности животных. Ниже приведено описание материалов, ухода за животными и хирургического метода, необходимых для успешного и гуманного проведения этой довольно сложной процедуры.
Сначала я опишу необходимые хирургические материалы. Животное — взрослая самка, альбинос морской свинки линии Duncan Hartley из Charles River International Laboratories Incorporated. Для подготовки помещения и стерильного оснащения вам понадобятся стерильная хирургическая одежда, операционный микроскоп со стерильным чехлом, небольшая фенестрированная простыня Mars, интраоперационная грелка и аспирационный аппарат.
Отсос номер 5, стерильный физиологический раствор для отсоса номер 40, стальной лоток и фиксатор головы. Для анестезии потребуются кетамин в дозе 60 mg/kg и ксилазин в дозе 12 mg/kg. Для предоперационной подготовки понадобятся глазной лубрикант на нефтяной основе, электрическая бритва, Бетадин и 70% этиловый спирт. Для интраоперационного этапа потребуются 0.6 mL 0.25% красителя, одноразовый безопасный скальпель номер 11, три изогнутых гемостата, периостальный элеватор Лира, хирургические щипцы WEX и отологический бор, а также алмазный бор 1.5 mm и алмазный бор 0.5 mm.
Прямая кюретка для извлечения костных фрагментов, шприц на 10 cc, костный воск, гемостатическая губка, рассасывающаяся нить 4-0 с режущей иглой P 13, зажим Адсона, иглодержатель с алмазными браншами и ножницы для швов. Для послеоперационного ухода потребуется чистая клетка с грелкой. 0,2 mls интерфлоксацина в концентрации 22,7 mg/mL.
Введите 0,05 мл бупренорфина в концентрации 0,3 мг/мл. Сначала проведите анестезию морской свинки кетамином в дозе 60 мг/кг и ксилазином в дозе 12 мг/кг внутримышечно. Данный режим обеспечивает 60–90 минут анестезии без угнетения дыхания, чего обычно достаточно для выполнения данной процедуры.
После применения анестезии животному на глаза наносят смазку на нефтяной основе. Затем с помощью электрического триммера выбривают шерсть на затылке — от верхнего отдела грудного отдела до макушки. После этого область обработки подготавливают раствором Бетадина, а затем спиртом.
Теперь животное готово к операции. Меня зовут доктор Клифф МакГиллион. Я профессор отоларингологии, хирургии головы и шеи в клиниках Университета Кейс-Вестерн Резерв в Кливленде и директор отделения отологии и нейротологии.
Сегодня я хочу рассказать вам о хирургической методике индукции эндолимфатического гидропса у морских свинок. Мы выполняем экстраоральный доступ, обнажаем сигмовидный синус, а затем, непосредственно кпереди и латерально от него, находим отверстие эндолимфатической системы, удаляем ткани протока и мешка, а затем высверливаем проток под прямым визуальным контролем.
Я считаю, что наиболее важной частью процедуры является скелетизация сигмовидного синуса с последующим смещением его медиально для прямой визуализации области эндолимфатического протока. После подготовки операционного поля животное переносят в операционную и фиксируют в головном держателе. Шею сгибают для обеспечения достаточного доступа к затылочному гребню, после чего область стерилизуют и застилают стерильным бельем в целях обеспечения здоровья и безопасности животного.
Соблюдайте те же правила стерильности, которые потребовались бы при работе с пациентом-человеком; чтобы поддерживать надлежащую температуру тела во время процедуры, убедитесь, что под операционным столом перед первым разрезом размещена грелка. Вокруг места хирургического вмешательства вводится маркер. Хирургическая процедура начинается с выполнения срединного дорсального разреза кожи скальпа вдоль затылка. Для обеспечения достаточного обзора разведите кожу, зафиксировав гемостатические зажимы по обе стороны от разреза; электрокоагуляция не потребуется, так как морская свинка обладает эффективным механизмом гемостаза.
Затем вдоль мышц шеи делают горизонтальный разрез. Для обнажения костного затылка правильно выполненный разрез может сразу открыть линию височно-затылочного шва, как показано здесь. Пересечение большого затылочного нерва, который обычно залегает под мышцей, может вызвать подергивание животного.
Несмотря на достаточное обезболивание при разрезании мышц, важно прощупывать кость под лезвием. В противном случае разрез может оказаться слишком низким, что создаст риск пересечения спинного мозга после прохождения через мышцы шеи. Третий гемостат используется для захвата верхней части разреза и удерживается ассистентом хирурга.
Для обнажения затылочной кости используется тупая диссекция. Помните, что необходимо постоянно находиться справа от наружного затылочного гребня, при этом левое ухо служит контролем. В данной модели затем используется периостальный элеватор Лампера для дальнейшего обнажения черепа, а также наружного затылочного гребня и линии височно-затылочного шва. Сверление алмазным бором 1.5 millimeter начинается непосредственно ниже линии шва.
Цель состоит в том, чтобы обнажить заднюю черепную ямку и сигмовидный синус. Все сверление должно постоянно проводиться по линии разграничения височно-затылочной области или ниже нее. Постоянно используйте отсасыватель с трубкой номер пять для удаления крови.
Также попросите ассистента поддерживать увлажнение операционного поля стерильным физиологическим раствором, который должен непрерывно капать из шприца объемом 10 cc. Сверление вызовет кровотечение из костного мозга, но алмазным бором можно коагулировать кровоточащие сосуды на глубине примерно один миллиметр.
Появится слабая голубая линия. Это сигмовидный синус. Просто оставайтесь в этом положении.
Выполните латеральный доступ к сигмоидному синусу. Здесь можно обнаружить окончание эндолимфатического протока. Важно определить границы сигмоидного синуса, не повреждая его стенку.
Когда вышележащая кость станет достаточно тонкой, сверление прекращают, а отсасыватель меняют на размер 40. Также используют большее увеличение. С помощью прямого зонда осторожно удаляют вышележащую кость.
Сигмовидный синус осторожно ретрагируют медиально, открывая оперкулум, который может быть плохо виден из-за скопления крови. Теперь скелетизированный сигмовидный синус осторожно ретрагируют медиально, открывая оперкулум. Затем в бороздке просверливают отверстие с помощью меньшего режущего бора 0,5, разрушая эндолимфатический мешок и в конечном итоге достигая эндолимфатического протока.
Проток виден как темный овал на фоне белого окружающего костного вещества. Просверлите около 1 mm протока, после чего заполните его костным воском. Костный воск вводится в проток с помощью гелевой губки.
Данная окклюзия эндолимфатического протока вызовет эндолимфатическую гидропсию. Для сведения краев мышцы используется полисорбная нить 4.0. Затем следует бесшовный переход к методу подкожного наложения швов для закрытия разреза кожи. При таком способе закрытия нет необходимости в последующем удалении швов, а также отсутствует риск того, что животное расчешет место операции или вырвет шов или скобу.
После операции морскую свинку помещают в инкубатор для поддержания температуры тела, проверяя ее состояние каждые 30 минут до полного пробуждения. Оценивают частоту дыхания и цвет кожных покровов животного. В данном центре для профилактики инфекций используют антибиотик широкого спектра действия и бупренорфин для купирования болевого синдрома.
Как и при любом хирургическом вмешательстве, существуют риски для субъекта. Поэтому сейчас я разберу возможные интраоперационные осложнения и способы их предотвращения. При угнетении дыхания хирургу следует постоянно контролировать дыхание животного на случай, если оно замедлится или прекратится.
Прекратите операцию и визуально проверьте наличие движений грудной клетки. Если животное находится в состоянии апноэ, убедитесь, что рот и дыхательные пути не перекрыты. При повреждении сигмовидного синуса используйте гемостатическую губку и компрессию вместе с наконечником аспиратора до полной остановки кровотечения.
Прикрывайте место прокола твердой мозговой оболочки гелевой губкой; при повреждении вестибулярного аппарата не сверлите более чем на один миллиметр латеральнее сигмовидного синуса, иначе может быть поврежден задний полукружный канал, что сделает все данные по данной конкретной морской свинке недостоверными. Хирургическая перевязка эндолимфатического протока у морской свинки представляет собой технически сложную операцию, однако при наличии подходящих инструментов, инструкций и знаний соответствующей анатомии ее можно провести гуманно по отношению к животному и эффективно в качестве модели болезни Меньера у человека.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данном видео демонстрируется хирургическое перекрытие эндолимфатического протока у морской свинки, приводящее к развитию эндолимфатического гидропса. Эта модель имеет важное значение для изучения патологий внутреннего уха, связанных с болезнью Меньера.
Данная хирургическая модель представляет собой воспроизводимый метод индуцирования эндолимфатического гидропса у морских свинок, что позволяет проводить механистические исследования нарушений регуляции жидкости во внутреннем ухе, имеющих значение для патофизиологии болезни Меньера. Экстрадуральный доступ снижает хирургическую заболеваемость при сохранении достоверности модели, что способствует доклинической валидации мишеней и разработке методов анализа для терапии заболеваний уха. Модель служит релевантной системой для оценки влияния соединений на гомеостаз эндолимфы и функцию слуха.
Данная модель интегрирована в континуум открытий — от валидации мишени и идентификации соединений-лидеров до доклинических испытаний эффективности, в частности при отологических заболеваниях, связанных с нарушением жидкостного баланса.