Амбулаторно запись ЭКГ у мышей

Для проведения операции по установке маяка выбрейте шерсть на брюшке мыши, введите животное в состояние наркоза и стерилизуйте кожу живота и груди в области предполагаемого операционного разреза. С помощью скальпеля сделайте вертикальный разрез по срединной линии живота, обнажив брюшину. Выполните еще один вертикальный разрез по срединной линии брюшины для введения телеметра. Установите TER в правую часть брюшной полости под брюшину так, чтобы снаружи оставались только электроды.

После этого закрывают брюшину и подкожно имплантируют электроды TER таким образом, чтобы отрицательный или белый электрод находился в верхней правой части грудной клетки, а положительный или красный электрод — в верхней левой части брюшной полости. В завершение кожу зашивают швами. Здравствуйте, я Марк Макколи из лаборатории Зандра Уирена на кафедре медицины Медицинского колледжа Бейлора.

Сегодня я продемонстрирую вам методику имплантации ЭКГ-телеметров мышам. Мы используем этот метод для изучения изменений частоты и ритма сердечных сокращений у мышей. Итак, приступим.

Перед имплантацией ЭКГ-телеметра в мышь важно убедиться, что устройство стерильно и находится в исправном состоянии. На данном примере представлен телеметр для мелких животных компании Data Sciences International с красным положительным и белым отрицательным электродом. Каждый электрод имеет изолирующую оболочку, два миллиметра оголенного провода и пластиковый колпачок на конце, который предотвращает прорезание электрода через кожу.

Новые телеметрические устройства обычно поставляются производителем в стерильном виде, однако ТЕР могут быть использованы повторно при условии воздушной очистки с применением 1% раствора zyme в течение более четырех часов. Кроме того, для стерилизации ЭКГ-телеметра следует использовать дезинфицирующее средство WA OFI O в течение ночи. Перед имплантацией мышам обязательно промойте устройство стерильной водой, чтобы удалить остатки дезинфицирующего средства.

Проверьте целостность проводящих жил и изоляционной оболочки выводов телеметра. Включите телеметрический передатчик с помощью магнита и проверьте сигнал с помощью AM-радиоприемника, настроенного на частоту 5,30. Сигнал должен быть сильным, четким и изменять интенсивность и высоту тона при манипуляциях с проводами.

Запишите номер модели, серийный номер TER и значение калибровки ЭКГ. Если применимо, производители часто рекомендуют, чтобы TER был включен в течение 24 часов до имплантации. Обратитесь к руководству по эксплуатации вашего конкретного TER.

Для подготовки электрода TER обрежьте отрицательный (белый) провод примерно до 3,5 сантиметров, а положительный (красный) — до 2,5 сантиметров. Это оптимальная длина для имплантации отрицательного электрода в правую часть грудной клетки, а положительного — в левую часть брюшной полости. Затем снимите изоляционную оболочку, чтобы обнажить семь миллиметров провода.

Нанесите суперклей на концы металлического электрода, после чего закрепите колпачки на металлических наконечниках. Эти колпачки предотвратят эрозию кожи при установке электродов. Для электрической регистрации собственного сердечного ритма должно оставаться открытыми примерно два-три миллиметра металлического провода.

Соблюдение правил стерильности имеет решающее значение при проведении операции. Для имплантации телеметра вам понадобятся стерильные перчатки, стерильная салфетка и шесть шовных материалов из пролина. Все хирургические инструменты должны быть стерилизованы в стеклебисерном стерилизаторе, нагретом до 250 °C.

В этот набор входят два пинцета, одни ножницы с тупыми концами, скальпель и иглодержатель. Обязательно простерилизуйте и промойте TER, как было описано ранее. Используйте этот набор для подготовки мыши к операции.

Сначала проведите первичную анестезию животного в индукционной камере. Убедившись с помощью щипка за палец, что мышь достаточно седирована, полностью выбрейте шерсть на животе и груди мыши электрическим триммером. Повторно проведите анестезию мыши изофлураном, после чего перенесите ее в трубку для анестезии с постоянным потоком.

Положите животное в положение на спине головой от себя, а хвостом к себе. Прикрепите лапы мыши к подогреваемому хирургическому столу с помощью фиксирующей ленты. Используйте грелку для поддержания температуры анестезированного животного в узком диапазоне 37 ± 1 °C.

Для мониторинга температуры можно использовать ректальный датчик. Протрите живот мыши спиртовой салфеткой, чтобы удалить остатки выбритых волос и очистить операционное поле. Трижды обработайте живот и грудную клетку ватными тампонами с Бетадином для дезинфекции. Наложите стерильную салфетку на живот мыши для имплантации тотера в брюшную полость.

Начните со скальпелем с выполнения вертикального срединного разреза кожи длиной около 2,5 сантиметров в области живота, используя тупоконечные ножницы. Осторожно отделите кожу от подлежащих соединительных тканей. Затем сделайте вертикальный срединный разрез по белой линии живота над брюшиной длиной примерно 1,5 сантиметра.

Кроме того, сделайте небольшое отверстие в брюшине, чуть краниальнее от разреза брюшины, которое будет служить выходом для подкожных электродов. Во время проведения операции поддерживайте увлажненность хирургического поля, время от времени капая стерильный физиологический раствор на операционную область. Введите TER в правую брюшную полость.

Введите пинцет в отверстие выше TER и вытяните оба электрода через отверстие для электродов так, чтобы они выступали из брюшины. Используйте непрерывный шов нитью пролин 6-0 для закрытия вертикального срединного разреза брюшины длиной 1,5 сантиметра. Расположите электроды ЭКГ в конфигурации второго отведения.

Отрицательный электрод в белой прозрачной оболочке будет помещен в правую грудную область. Сначала сделайте разрез кожи длиной 0,5 сантиметра в верхней правой части грудной клетки мыши. Затем с помощью тупоконечных ножниц сформируйте туннель обратно к разрезу в брюшной полости.

Протяните отрицательный электрод через туннель и с помощью проленской нити размером 6-0 зафиксируйте электрод к грудной мышце. Убедитесь, что шов расположен поверх открытой части электрода и обеспечивает надежный контакт между открытым металлическим проводом и подлежащей мышцей. Используйте второй шов проксимальнее предыдущего, чтобы иммобилизовать электрод относительно мышцы.

Закройте разрез кожи двумя или тремя пролиновыми швами. Положительный электрод помещают в левую часть брюшной полости ниже левой диафрагмы и сердца. Дополнительный разрез в этом месте не требуется, так как точка имплантации электрода находится рядом с вертикальным срединным разрезом.

Используйте проленовую нить 6-0 для фиксации электрода к подлежащей брюшной мышце, обеспечив плотный контакт с тканью. В завершение послойно зашейте брюшную мышцу и кожу, используя проленовую нить 6-0. Обеспечьте мыши надлежащий послеоперационный уход согласно описанию в тексте нашего протокола.

Теперь мы продемонстрируем репрезентативные результаты нормальной формы сигнала ЭКГ. На нормальной ЭКГ мыши дикого типа отчетливо виден зубец P, который соответствует деполяризации предсердий, за которым следует комплекс QRS, соответствующий деполяризации желудочков. Обратите внимание, что зубцы P и комплекс QRS четко выделяются на фоне небольших фоновых шумов и что каждому зубцу P предшествует один комплекс QRS в соотношении один к одному.

Также обратите внимание, что расстояние между каждым зубцом R, называемое R-R интервалом, и между каждым зубцом P, называемое длительностью синусового цикла, является регулярным, что указывает на нормальный синусовый ритм у мыши. Таким образом, мы продемонстрировали способ имплантации ЭКГ-телеметра в мышь для амбулаторной записи ЭКГ. При выполнении этой процедуры важно тщательно очистить телеметр перед введением, расположить электроды в соответствующих позициях, полностью закрыть брюшную полость и, наконец, обеспечить адекватную аналгезию мыши после процедуры.

На этом всё. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.