Определение Реакционная способность и титр сыворотки использованием гемагглютинации Пробирной

Определение реакционной способности и титра для сыворотки крови с помощью анализа на гемагглютинин. Глютеновая нация — это реакция, которая происходит между растворимыми антителами и твердыми антигенами. Они могут включать клетки или молекулы-переносчики.

Эпитопы на поверхности носителя позволяют антителу связываться и сшивать носитель вместе, что приводит к образованию сложной решетки, называемой комплексом антител к антигену. Гем-агглютинация — это специфическая форма агглютинации, при которой антитела связываются с эритроцитами, которые действуют как дисперсный антиген. Красные кровяные тельца являются полезными мишенями, поскольку они легко доступны, а результаты можно легко увидеть невооруженным глазом.

Образцы сыворотки последовательно разбавляют, а затем помещают в 96-луночный убо-планшет. Затем добавляют суспензию эритроцитов Riva cells. При наличии антител в высокой концентрации происходит связывание с эритроцитами, образуя большую решетку.

Поскольку эта решетка оседает под действием силы тяжести, она принимает форму пластины убо. Если смотреть сверху, виден широкий слой эритроцитов. Это положительная реакция гемагглютинина.

Когда уровень антител низкий, решетка не может образоваться, и эритроциты принимают форму пластины UBO и концентрируются в основании, образуя небольшую гранулу. Это отрицательная реакция агглютинации края. На этой диаграмме показана положительная реакция.

Ячейки образуют решетку по мере оседания, они соответствуют форме U-образной нижней пластины. Слева и справа мы видим вид сверху, где виден широкий лист красных кровяных телец. Если присутствует промежуточное количество антител, будет наблюдаться образование некоторых букв.

Агглютинация кромки также позволяет проверить реакционную способность различных образцов сыворотки крови против известного антигена. Также можно определить титр образца сыворотки. Титр является последним разведением, при котором наблюдалась положительная реакция.

В норме, чем выше концентрация антител в образце сыворотки, тем выше титр. На этой диаграмме показана отрицательная реакция агглютинации кромки. Недостаточное количество антител для сшивания эритроцитов.

Когда ячейки оседают под действием силы тяжести, они скользят вниз по стенке колодца, образуя плотную гранулу на дне. На диаграмме справа показаны эритроциты при взгляде сверху. Для этого эксперимента вам понадобится 1 96 лунка U-образной нижней пластины.

Очень важно, чтобы использовалась U-образная нижняя пластина, так как плоские донные пластины не позволяют клеткам оседать в гранулу, что делает интерпретацию невозможной. Питомец, способный доставить 50 микролитров, тестирует сыворотку, 1% суспензию клеток Riva и одноразовый раствор буферного раствора верона в каждую лунку ряда. Один к 12, введите 50 микролитров розового буферного физиологического раствора.

Он используется в качестве разбавителя. Теперь поместите 50 микролитров сыворотки в лунку, А. Это ваше первое разведение один раз в два.

С помощью перпета убедитесь, что образец сыворотки тщательно перемешан. После смешивания удалите 50 микролитров из лунки А один и переложите в лунку А два. Это ваше второе разведение один раз в два, что дает вам четырехкратное разведение.

Продолжайте эту серию разубоживания с помощью скважин с 3 по 11. Не помещайте сыворотку в, ну, 12, так как это ваш розовый буфер физиологического раствора негативного контроля. Теперь возьмите 1% суспензию клеток Ривы, которые были тщательно перемешаны, и перенесите 50 микролитров в, ну, через один в лунку А 12.

После того, как клетки будут добавлены, накройте планшет и осторожно постучите по пластине, чтобы убедиться, что образцы и клетки перемешаны. Теперь выдерживайте при температуре 37 градусов в течение 60 минут. Уместен увлажнённый инкубатор.

В течение 60-минутного инкубационного периода происходит взаимодействие антигенных антител, и клетки начинают оседать. Видеоматериал, который вы просматриваете, представляет собой покадровую съемку всего 60-минутного периода. Это крупный план скважин с 5 по 10.

Мы уже рассмотрели, ну, 12, что было вашим контролем VBS в этом. Ну, клетки образовали плотную гранулу, указывающую на то, что анализ функционировал должным образом. Пятый и шестой колодцы являются примерами положительной агглютинации кромки.

Ну, семь — это пример промежуточного результата агглютинации, в то время как скважины 8, 9 и 10 отрицательны для агглютинации кромок. На основании этого результата будет определен титр на основе разбавления для скважины семь, так как это была последняя скважина, где наблюдалась положительная реакция.