Ортотопическая аорты трансплантации: Крыса модель для изучения развития хронического заболевания сосудов

Общая цель данной процедуры заключается в создании точной модели и легко реализуемого метода для исследования развития трансплантационной васкулопатии. Это достигается путем использования комбинации линий PVG и CI. Вторым этапом процедуры является забор аорты донора.

Третьим этапом процедуры является подготовка реципиента. Заключительным этапом процедуры является наложение анастомоза между донорской аортой и аортой реципиента. В конечном итоге с помощью патогистологического анализа можно получить результаты, демонстрирующие формирование неоинтимы.

Здравствуйте, я Соня Швефель, профессор иммунологии трансплантации в лаборатории TS Eye в Университетском кардиологическом центре в Гамбурге, Германия. А я Маниш Дубофф, также из лаборатории TS Eye.

Моя лаборатория занимается вопросами иммунологии трансплантации. В этом видео мы представим модель ортотопической трансплантации аорты — простой и достоверной модели для изучения развития васкулопатии трансплантата у крыс. Мы используем эту процедуру в нашей лаборатории для исследования хронического отторжения при трансплантации сердечно-сосудистой системы.

В модели ортотопической трансплантации аорты гистологическая оценка аорты проводится легко. Кроме того, модель трансплантации PVG от донора к реципиенту с CI особенно полезна для изучения васкулопатии трансплантата. Это связано с тем, что острое сосудистое отторжение не является основным искажающим фактором, а развитие васкулопатии схоже с клиническими данными.

Приступим. В качестве донора при этой ОРТОТОПИЧЕСКОЙ трансплантации аорты используется крыса линии PVG весом примерно 250–300 граммов. После наркотизации животного выбрейте шерсть на брюшной и грудной клетке.

Положите крысу на спину и наденьте лицевую маску на нос и рот. Для поддержания анестезии широко продезинфицируйте область живота и грудной клетки, используя йод Provo, а затем 80% ethanol. После этого проверьте рефлексы животного, сжимая его задние лапы.

Чтобы подтвердить достаточность анестезии, проведите обескровливание крысы, вскрыв брюшную полость и сделав разрез в брюшной аорте. Осторожно вскройте грудную клетку, чтобы найти нисходящую грудную аорту.

Отделите грудную аорту от окружающих тканей, таких как жир, нервы и пищевод. С помощью скальпеля acuta извлеките фрагмент аорты длиной 1.5 сантиметра, избегая повреждения тканей сосуда. Тщательно промойте аортальный трансплантат холодным физиологическим раствором и храните его при температуре четыре градуса Цельсия.

Реципиентом для данной ортотопической трансплантации аорты является крыса линии A CI весом примерно 250–300 граммов. Для начала процедуры выбрейте шерсть на брюшной области анестезированной крысы и нанесите глазную мазь, чтобы предотвратить пересыхание глаз во время наркоза. Поместите крысу на спину и наденьте лицевую маску на нос и рот для поддержания анестезии.

Затем продезинфицируйте область живота, используя раствор йода, а затем 80% ethanol. После ущипывания задних лап для подтверждения достаточного уровня анестезии крысы, вскройте брюшную полость, выполнив срединный разрез живота и разделив кожу и мышцы. Два шага.

После вскрытия брюшной полости поместите кишечник в перчатку с физиологическим раствором. Оберните кишечник перчаткой, чтобы предотвратить потерю влаги. Удалите жировую ткань, покрывающую брюшную аорту.

Препарируйте аорту от инфраренального отдела до бифуркации, стараясь не повредить ветви сосудов. При необходимости перевяжите ветви аорты после ее препарирования. Сначала установите микрохирургический зажим на инфраренальный отдел аорты, чтобы остановить кровоток.

Затем установите второй зажим рядом с бифуркацией аорты. После прекращения кровотока удалите короткий сегмент аорты. Затем возьмите донорский трансплантат аорты, который хранился в 0.9% saline на льду.

Укоротите его до подходящей длины и поместите в дефект аорты. Соедините аорту донора с аортой реципиента с помощью непрерывного шва нитью пролен 8-0, начав с краниального концевого анастомоза. После завершения дистального концевого анастомоза осторожно откройте дистальный зажим.

Затем осторожно откройте зажим на черепе. На дистальном конце аорты должна быть видна пульсация. Теперь верните кишечник обратно в брюшную полость и промойте ее предварительно подогретым стерильным физиологическим раствором.

Зашейте мышечный слой брюшной стенки с помощью непрерывного шва нитью пролен 6-0. Затем, пока крыса находится под воздействием анестезии, зашейте кожу непрерывным швом нитью пролен 5-0. Подкожно введите 4–5 мг/кг каропрофена.

Верните животное в клетку. Для обезболивания добавляйте метимазол в питьевую воду в течение трех дней после трансплантации.

Результаты гистопатологического исследования через 120 дней будут продемонстрированы с помощью нашего гистологического микроскопа. На снимках будет четко видно развитие васкулопатии трансплантата. Развившееся сужение просвета будет выделено с помощью компьютерной анимации.

Мы только что продемонстрировали вам, как выполнить аутотопическую трансплантацию аорты у крыс. Мы также с помощью гистопатологического анализа подтвердили успешное развитие трансплантатной васкулопатии через 120 дней. Данный метод позволяет исследовать начальное воздействие препаратов на хроническую васкулопатию аллотрансплантата.