Ортотопическая инъекция в жировую подушку молочной железы: установление рака молочной железы у мышей

Во-первых, установите желаемую клеточную линию рака молочной железы в культуре. За день до операции побрейте живот мыши и используйте крем для депиляции, чтобы удалить шерсть и обнажить паховые соски. В день операции соберите клетки, обезболите мышь и подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги. С помощью пинцета сожмите кожу вокруг соска, чтобы создать приподнятый туннель.

Затем с помощью шприца собранных клеток прокалывают кожу. Игла должна следовать по туннелю до тех пор, пока кончик не приблизится к соску. Аккуратно переместите кончик иглы вверх в жировую подушку молочной железы, чуть ниже соска. Удалите пинцет, чтобы сформировать кожный шатер с помощью иглы, а затем медленно введите клетки.

Наконец, втяните шприц, стараясь не потревожить круглый бугорок, окружающий сосок. Введенные клетки и последующие опухоли экспрессируют люциферазу и могут быть отслежены с помощью биолюминесцентной визуализации. В примере протокола мы покажем установление мышиного ортотопического рака молочной железы. За день до операции вручную зафиксируйте реципиентную мышь и поверните животное брюхом вверх к шерсти, подлежащей бритью, вокруг четвертых сосков.

Протрите шерсть тонким слоем крема для депиляции. Используется дистиллированная вода для снятия крема через 30 – 60 секунд. И обсушите мышку мягкими бумажными полотенцами. В день операции развести суспензию клеток рака молочной железы мыши в соотношении 2 х 10 до 5-й клетки на миллилитр концентрации PBS в стерильной микроцентрифужной пробирке на льду.

Перед каждой инъекцией загружайте один, один миллилитровый шприц, оснащенный иглой .45 на 16, с 50 микролитрами клеток на мышь. И подтверждают отсутствие реакции на ущипывание пальца ноги у каждого усыпленного животного. Нанесите мазь на глаза животного и с помощью пинцета наклейте кожу вокруг четвертого соска первой мыши, чтобы создать туннель для шприца.

Держите шприц скосом вверх и подкожно введите в кожу на расстоянии от пяти до 10 миллилитров от соска, следуя по туннелю, пока кончик иглы почти не достигнет соска. - С помощью пинцета наденьте кожу вокруг первого соска, чтобы создать туннель, по которому будет следовать шприц. Игла должна быть введена между кончиками пинцета и должна подниматься вверх, а не вдавливаться в ткань. Осторожно переместите кончик иглы вверх в жировую подушку молочной железы до тех пор, пока скос не окажется под соском.

И освободите кожу, чтобы обеспечить медленную инъекцию раковых клеток. - После введения осторожно переместите кончик иглы вверх в жировую подушку молочной железы до тех пор, пока скос не окажется под соском, и вы не почувствуете сопротивление, обеспечивающее доставку клеток в нужное место. Когда все клетки будут введены введено, слегка поверните иглу в сторону и медленно втяните шприц. С помощью ватного тампона прижмите рану от иглы в течение 10–20 секунд, чтобы убедиться в отсутствии просачивания жидкости.

Впрыскиваемый сосок должен выглядеть в виде прозрачной белой плоской сферы, с соском в центре