Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:01 мин. • April 30th, 2023
Вырастите нужную клеточную линию в качестве адгезивного 2D монослоя. Удалите питательную среду и промойте фосфатно-солевым буфером или PBS. Затем добавьте трипсин и инкубируйте, пока клетки отделяются от поверхности колбы и приобретают круглую форму. Добавьте свежую среду для нейтрализации трипсина и подвески клеток. Переложите смесь в коническую трубку и используйте центрифугу для гранулирования ячеек.
Замените надосадочную жидкость свежей средой и повторно суспендируйте гранулу клетки. С помощью гемоцитометра подсчитывают количество клеток и рассчитывают рабочую концентрацию. Затем перелейте нужное количество клеточной смеси в лунку со сверхнизкой адгезией с круглым дном и инкубируйте. Ячейки оседают на дно и агрегируются. В конечном итоге они прикрепятся друг к другу и сформируют компактную сборку 3D-клеток, сфероид.
В примере протокола мы увидим, как создать 3D-сфероиды из клеточной линии рака толстой кишки и как применяется визуализация в реальном времени для отслеживания их формирования. Начните с промывания интересующей линии клеток колоректального рака пятью миллилитрами PBS и удалите клетки со дна колбы 0,5 миллилитрами трипсина в течение пяти минут при температуре 37 градус
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео