Дрозофила in vivo Визуализация кальция: метод функциональной визуализации активности нейронов

- Чтобы выполнить визуализацию кальция в нервной системе дрозофилы in vivo, нацельтесь на экспрессию генетически кодируемого индикатора кальция, такого как GCaMP, на интересующие нейроны. Когда нейроны активируют потенциал действия, быстрая деполяризация мембраны приводит к открытию потенциал-зависимых кальциевых каналов, что приводит к притоку внеклеточного кальция в клетку.

GCaMP представляет собой гибридный белок, в котором усиленный зеленый флуоресцентный белок, или EGFP, модифицируется и сливается с M13-фрагментом легкой цепи миозина на N-конце и с кальций-связывающим белком, кальмодулином, на C-конце. Кальций связывается с кальмодулином, вызывает конформационные изменения в GCaMP, вызывая увеличение флуоресценции белка.

Чтобы изобразить изменения флуоресценции GCaMP в качестве показателя активности нейронов in vivo, обнажите область нервной системы с ожидаемой активностью. Затем используйте флуоресцентный микроскоп, который может фиксировать динамику GCaMP и оснащен установкой подачи стимула. Подайте стимул, например, запах, одновременно регистрируя флуоресценцию GCaMP в реагирующих нейронах.

В примере протокола мы увидим, как функциональная визуализация GCaMP используется дл