Анализ реакции на побег: метод изучения реакции личинки данио-рерио на сенсорные раздражители

- Для начала аккуратно перенесите несколько эмбрионов в чашку Петри, содержащую среду для эмбрионов. Теперь зажмите хорион щипцами и сделайте в нем надрыв другим щипцом.

Далее аккуратно протолкните эмбрион через разрыв. Удаление хориона из эмбриона ускоряет его рост и движение. Чтобы избавиться от мусора, перенесите эмбрионы в другую чашку Петри, содержащую эмбриональную среду, с помощью пипетки Пастера.

Поместите чашку Петри в инкубатор и дайте эмбрионам расти при температуре 28 градусов Цельсия. Перед началом эксперимента установите наполненный водой предметный столик микроскопа с подсветкой на 28 градусов Цельсия, чтобы избежать любых отклонений в поведении личинок, связанных с температурой.

Поместите чашку Петри на сцену и закрепите камеру над чашкой. Затем центрируйте эмбрион в поле зрения камеры. Теперь осторожно коснитесь эмбриона тупой иглой и запишите реакцию личинки на программное обеспечение для записи на видеокамеру.

При получении стимула эмбрион проявляет мощную реакцию бегства — стремительный заплыв с резкими поворотами. Измерьте время между прикосновением и пиковым ускорением личинки во время ее побега.

В примере протокола мы будем наблюдать за реакцией личинок данио рерио на внешние раздражители.

- Для проведения анализа поместите чашку Петри, наполненную примерно 25 миллилитрами эмбриональной среды, на освещенную сцену с регулируемой температурой, установленной примерно на 28 градусов Цельсия. Установите высокоскоростную камеру над тарелкой. Запустите программное обеспечение для записи видео и установите скорость съемки на 1 000 кадров в секунду, чтобы обеспечить съемку с высокой скоростью плавания.

Расположите эмбрион в центре чашки Петри, хорошо видимом в поле зрения. Нажмите на кнопку записи, а затем подайте механосенсорный стимул, осторожно коснувшись эмбриона тупой иглой на макушке головы.

Остановите запись после того, как эмбрион выплывет из поля зрения или вернется в состояние покоя.

- Повторное тестирование одних и тех же личинок может привести к привыканию или способствовать мышечной слабости в некоторых моделях заболеваний, что приводит к снижению реакции на тактильный стимул. Поэтому каждый эмбрион должен быть протестирован только один раз.