Тест предпочтений светло-темного света: метод изучения тревожного поведения у рыбок данио

- Во-первых, создайте трехсторонний вольер вокруг испытательной зоны, чтобы свести к минимуму внешние раздражители, которые могут повлиять на поведение рыб. Настройте диффузное верхнее освещение, чтобы избежать отражений на поверхности воды. Далее заполните арену, которая разделена на темную и светлую зоны, водой в среде обитания поддерживается на уровне 28 градусов по Цельсию.

Поместите манеж в вольер. Держите аквариум с рыбами, которых нужно проверить, за пределами вольера. Дайте рыбам акклиматизироваться, чтобы снизить стресс.

Теперь аккуратно вытащите рыбу из аквариума с местом обитания и поместите ее в тестовый аквариум. Расположите рыбу перпендикулярно длинным сторонам арены, чтобы избежать смещения в сторону любой из зон. Понаблюдайте за поведением рыбы с помощью программного обеспечения для записи и повторите тест для остальной рыбы. Измерьте среднее время, проведенное каждой рыбой в светлой и темной зонах.

Рыбки данио, как правило, проводят больше времени в темной зоне, когда они обеспокоены. В примере протокола мы проведем тест «свет-темнота», чтобы наблюдать за влиянием воздействия этанола на поведение рыбок данио.

- Приобретите светло-темную арену шириной 9 и 1/2 сантиметра в длину и 55 сантиметров в длину и глубиной 9 и 1/2 сантиметра с белым водонепроницаемым полом. Прикрепите белую и черную водонепроницаемую антиотражающую бумагу к внутренним стенам арены с помощью Velcro, при этом половина арены должна быть покрыта белым, а половина - черным. Заполните арену на глубину до 5 сантиметров водой для обитания температурой от 25 до 28 градусов по Цельсию. Поддерживайте эту температуру на протяжении всего тестирования.

Сведите к минимуму внешние визуальные стимулы, построив белый трехсторонний корпус для размещения арены. Убедитесь, что в зоне тестирования используется диффузное верхнее освещение, которое не вызывает отражений на поверхности воды, но при этом достаточно яркое для программного обеспечения для отслеживания движений или специального ручного количественного анализа по видеоизображениям. Затем задайте параметры записи и анализа движений программного обеспечения для отслеживания поведения с продолжительностью пробной версии от 5 до 15 минут, в зависимости от исследовательского вопроса.

Транспортируйте группу рыб, подлежащих тестированию, в исследовательскую зону в резервуаре для обитания и размещайте их за пределами ограждения арены. Дайте рыбе акклиматизироваться в течение 10 минут. Аккуратно поймайте рыбу из соответствующей группы и поместите в центр светло-темной арены, отпуская каждую рыбу, когда она расположена параллельно длинной оси арены, чтобы избежать смещения рыбы в светлую или темную зону.

Начинайте записывать поведение сразу после того, как животное будет выпущено. Следите за любыми программными проблемами с отслеживанием рыбы, а также за прыжками или замерзанием рыбы. После того, как испытание закончится, аккуратно зачистите рыбу сетями и переместите рыбу из арены в резервуар для содержания или аквариум для обитания. Поверните арену на 180 градусов после того, как половина испытуемых будет протестирована, чтобы предотвратить любые искажения из-за смещений, возникающих в результате того, что конец арены ориентирован в сторону открытого конца ограждения.

Начните анализ с изучения времени, проведенного в светлых и темных зонах. Для каждой группы и для каждой рыбы получите относительное время, проведенное в светлой и темной зонах, и проанализируйте с помощью одного образца t-теста, чтобы определить, значительно ли группы предпочитают одну область другой. Чтобы сравнить предпочтения, рассчитайте индекс предпочтений, вычитая время, проведенное в светлой зоне, из времени, проведенного в темной зоне, и сравнивайте различия между группами с помощью t-критериев. Сравните несколько групп с помощью одностороннего дисперсионного анализа, используя при необходимости честный апостериорный тест существенной разницы Тьюки.