$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Закрепите рыбу под наркозом на платформе так, чтобы ее глаза и жабры выходили за край платформы. Поместите рыбу вертикально в наполненный водой цилиндр внутри хорошо освещенного барабана, который может свободно вращаться. Как только рыба оживет, о чем свидетельствуют жабры и движения глаз, поместите в барабан решетку или узор из чередующихся белых и черных вертикальных полос. Теперь поместите сплошной черный окклюдер поверх полос в поле зрения левого глаза.
Начните вращение и запишите оптокинетическую реакцию, OKR, для правого глаза. OKR состоит из рефлекторных движений глаз в ответ на визуальный стимул. Заменяйте узор все более и более мелкими черными и белыми полосами, пока движение глаз не перестанет наблюдаться. Проделайте ту же процедуру для левого глаза.
Для вычисления монокулярной остроты зрения, умения различать мелкие детали, измеряют расстояние от центра хрусталика глаза до рисунка и длину мельчайшего рисунка пары белых и черных полос, при котором наблюдалось движение глаза. В примере протокола мы будем использовать оптокинетический ответ для измерения монокулярной и бинокулярной остроты зрения у взрослых рыбок данио
.
- Оптокинетические исследования проводятся с помощью специально сконструированного записывающего устройства с использованием вращающегося барабана диаметром 14,5 сантиметров, стереомикроскопа с регулируемыми настройками интенсивности света, компьютера и камеры для захвата изображений и записи. Микроконтроллер с компьютерным управлением используется для регулировки скорости вращения барабана и направления вращения. Используя рыб, которые содержатся в стандартных условиях, начните анализ с обезболивания рыбы 0,016% трикаином в течение двух-трех минут, а затем поместите ее на небольшую платформу с подвешенными через край глазами и жабрами.
Чтобы обездвижить рыбу и избежать травм, положите тонкую губку или полотенце на тело рыбы и приколите два-три кусочка пены над рыбой, ограничивая движение хвоста. Поместите рыбу в цилиндрический резервуар, наполненный водой, который помещается внутри вращающегося барабана записывающего устройства OKR. С помощью магнитов на платформе расположите рыбу вертикально с глазами примерно в 7,3 сантиметрах от края барабана.
Как только рыба оправится от анестезии и будет наблюдаться нормальное дыхание и случайные движения глаз, поместите базовую решетку со скоростью 0,07 циклов на градус или CPD во вращающийся барабан и включите компьютерные элементы управления, чтобы начать вращение и захват видео. После того как базовая решетка инициирует первоначальный OKR, кратковременно приостановите вращение и замените решетку на решетку меньшего размера с более высокой пространственной частотой. Повторяйте этот процесс с последовательно меньшими решетками до тех пор, пока OKR больше не будет выявляться. Чтобы проверить потерю OKR, после модифицированного подхода к лестнице повторите испытание с наименьшей решеткой, вызвавшей OKR, а затем с решеткой, которая не вызвала реакцию, чтобы проверить потерю OKR.
Чтобы получить монокулярные измерения остроты зрения, поместите черный пластиковый окклюдер на полосы, прилегающие к противоположному глазу, и повторите процесс сбора данных. Затем переключитесь на другой глаз, изменив положение окклюдера и проведя измерения. Используйте эталонную измерительную полоску под аквариумом, чтобы записать расстояние каждого глаза от полоски для точного измерения остроты зрения.
Чтобы определить остроту зрения, рассчитайте CPD по следующей формуле, где a — расстояние от центра линзы до решетки, а h — длина одного цикла наименьшей решетки, на которой наблюдался OKR. Для комбинированных измерений остроты зрения используйте среднее значение, рассчитанное как для левого, так и для правого глаза.