Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 2:52 мин. • April 30th, 2023
- Для начала вырастите эмбрионы в 3 чашках Петри. Первый из них представляет собой контрольную пластину, содержащую раствор Хэнка — сбалансированный раствор соли. Вторая и третья пластины содержат раствор Хэнка с потенциально нейротоксичным соединением в разных концентрациях.
Нейротоксическое соединение в растворе воздействия проникает через внешнюю мембрану эмбрионов путем пассивной диффузии и изменяет процессы нервной системы, такие как внимание, координация и мышечная активность. Как только эмбрионы разовьются в личинки соответствующего возраста, перенесите каждую личинку в отдельную лунку 48-луночной пластины. Следите за условиями лечения для каждого животного.
Перенесите пластину лунки на записывающую платформу и опустите крышку. Дайте личинкам акклиматизироваться в течение 10 минут. Устанавливайте чередующиеся циклы светлых и темных периодов с помощью программного обеспечения.
Личинки данио-рерио обычно демонстрируют больше движения в темноте и меньше движений на свету. Запишите общее расстояние, пройденное личинками контрольной и экспозиционной групп в каждом периоде. Если соединение нейротоксично, личинки проявляют еще больше движений в темноте и на свету, чем контрольные животные.
В следующем протоколе мы проведем поведенческие тесты на личинках данио-рерио, подвергшихся воздействию нейротоксических соединений.
- Не менее чем за 2 часа до проведения эксперимента установите комнатную температуру на 28 градусов Цельсия и добавьте по 800 микролитров экспозиционного раствора в каждую лунку 48-луночного микропланшета. Затем с помощью пипетки объемом 1 миллилитр с модифицированным наконечником перенесите по одной личинке из 200 микролитров раствора экспозиции в каждую лунку микропланшета, готовясь к эксперименту по локомоции и углу траектории.
Когда все параметры будут установлены, убавьте освещение в испытательной комнате и дайте личинкам акклиматизироваться в системе в течение 10 минут. По окончании периода акклиматизации нажмите кнопку «Экспериментировать и выполнить» и создайте папку, в которой будут сохранены экспериментальные файлы. Затем введите название результата и нажмите «Фон» и «Начало».
В конце эксперимента нажмите кнопку Экспериментировать и остановить. Затем верните 48 луночный микропланшет обратно в световой инкубатор для последующих экспериментов.