Таргетная абляция печени: индуцирование гибели гепатоцитов с помощью метронидазола у трансгенных личинок данио-рерио

- Растворите метронидазол в яичной воде, содержащей растворитель ДМСО, и добавьте фенилтиомочевину, которая препятствует образованию пигмента у эмбрионов. Перенесите несколько личинок соответствующего возраста на лечебные и контрольные пластины. Далее добавьте нужную концентрацию раствора метронидазола в тестовую пластину и яичную воду, содержащую ДМСО, в контрольную пластину.

Пусть личинки в обеих пластинах растут при температуре 28 градусов по Цельсию. Трансгенные личинки продуцируют нитроредуктазу только в гепатоцитах, что превращает метронидазол в цитотоксический препарат, что приводит к гибели только целевых гепатоцитов. После обработки удалите раствор метронидазола из лечебной пластины и промойте эмбрионы яичной водой.

Добавьте трикаин для обезболивания личинок и исследуйте их под эпифлуоресцентным микроскопом на предмет тяжелой абляции гепатоцитов — разрушения клеток печени. Вы будете наблюдать гораздо меньшую печень у пациентов, получавших лечение, чем у лиц контрольной группы. В примере протокола мы будем использовать метронидазол для абляции гепатоцитов у трансгенных личинок данио-рерио для изучения регенерации печени.

- Пересадите до 100 эмбрионов в 100-миллиметровую чаш