Экстракция ДНК из хвостовой клипсы: метод, используемый в генотипировании рыбок данио

- Начните процедуру с того, что положите взрослую рыбу под наркозом на стопку впитывающей бумаги. Теперь с помощью стерильного лезвия бритвы разрежьте хвостовой плавник и быстро перенесите рыб в аквариум с пресной водой для восстановления. Перенесите хвостовой зажим в чистую трубку, содержащую буфер для лизиса. Буфер для лизиса содержит неионогенные детергенты, которые растворяют плазматическую мембрану и ядерную мембрану клетки. Буфер также содержит фермент под названием протеиназа К, который расщепляет белки и обеспечивает высвобождение ДНК в лизат. Он также разрушает нуклеазы, защищая ДНК от расщепления нуклеаз.

Теперь оставьте трубки с хвостовыми зажимами в инкубаторе на ночь, чтобы полностью разрушить ткань при температуре 55 градусов Цельсия при непрерывном вращении. Затем нагрейте пробирку до 95 градусов Цельсия в течение 15 минут, чтобы инактивировать протеиназу К. Центрифугируйте пробирку, чтобы гранулировать непереваренный материал и перенести надосадочную жидкость, содержащую ДНК, в другую пробирку. Добавьте спирт для осаждения ДНК и снова центрифугируйте для сбора ДНК в грануле. В следующем протоколе мы выделим ДНК из хвостовой клипсы взрослой рыбки данио и из целого эм