Слоистый монтаж агара: подготовка живых эмбрионов данио-рерио к долговременной визуализации с помощью инвертированного микроскопа

- Начните с чашки Петри, содержащей эмбрионы в среде Е3. Добавьте трикаин для обезболивания эмбрионов и фенилтиоурию, раствор ПТУ, чтобы подавить образование пигмента. С помощью препарирующего микроскопа проводят дехорионацию эмбрионов.

С помощью стеклянной пипетки перенесите один из дехорионированных эмбрионов в небольшую чашку Петри с неглубоким стеклянным дном в центре и удалите лишнюю среду. Затем поместите раствор агарозы в оптимальную концентрацию, чтобы свести к минимуму деформацию и подвижность эмбриона, в микропробирку и нагрейте ее. Снизьте температуру до 30 градусов по Цельсию, чтобы не повредить эмбрион из-за тепла.

Высыпьте первый слой агарозы поверх зародыша, полностью заполнив неглубокую лунку. Поставьте над лункой еще одно защитное стекло и добавьте сверху 1% агарозы. Второй слой удерживает покровное стекло на месте.

Как только агароза застынет, заполните чашку Петри средой E3, содержащей трикаин. Это третий слой, который сохраняет агарозу и эмбрион увлажненными. В следующем протоколе мы выполним наложение слоистого агара на эмбрионы рыбок данио для длительной визуализации.

- Непосредственно перед установкой нагрейте раствор агарозы до 65 градусов Цельсия, а затем д