Энциклопедия экспериментов JoVE
Биология
0 просмотров • 3:24 мин. • April 30th, 2023
- Поместите интересующие эмбрионы в фенилтиомочевину, PTU, раствор Рингера для подавления образования пигмента, которое начинается через 24 часа после оплодотворения. Это делает развивающуюся анатомию более заметной, что необходимо для проведения данной процедуры. Перенесите эмбрион под наркозом трикаина в камеру визуализации. Поместите сверху предметное стекло и рассмотрите его под микроскопом. Сосредоточьтесь на травмируемом аксоне, который виден под 488-нанометровым лазером, потому что он трансгенетически экспрессирует GFP.
Сделайте предварительное изображение сайта. Затем посмотрите на аксон с помощью лазера с яркостью 910 нанометров, который заставляет GFP флуоресцировать красным цветом. Увеличьте интенсивность этого лазера, чтобы травмировать целевую область, не затрагивая окружающие ткани. Этот процесс называется аксотомией. Сделайте новый снимок с помощью первого лазера, чтобы подтвердить аксотомию, которая выглядит как разбросанные обломки. В следующем протоколе мы выполним аксотомию периферических сенсорных аксонов у эмбрионов рыбок данио-рерио с помощью двухфотонного лазера.
- Если в вашей лаборатории нет специально изготовленного двухфотонного эндоскопа, конфокальный дв
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео