Вскрытие хрусталика глаза: техника наблюдения за морфологией хрусталика данио-рерио

- Глаз рыбки данио состоит из роговицы, склеры, хрусталика и сетчатки. Роговица – это прозрачная ткань, которая позволяет свету проникать в глаз. Склера представляет собой непрозрачную ткань, которая непрерывно связана с роговицей, образуя внешний защитный слой. Хрусталик представляет собой сферическую структуру, которая фокусирует свет на сетчатке, которая представляет собой светочувствительный слой ткани, преобразующий свет в нейронный сигнал.

Чтобы препарировать глаз, наполните чашку Петри силиконом и дайте ей застыть. Теперь положите в блюдо рыбу под наркозом и вырежьте глаза с помощью микроножниц. Перенесите глаза на пластину, наполненную PBS, чтобы поддерживать постоянный pH в тканях и ориентировать глаз задней стороной вверх. Зажмите глаз щипцами и аккуратно сделайте три радиальных разреза через склеру и сетчатку.

Затем сложите ткань, чтобы открыть хрусталик. Теперь расположите глаз передней стороной вверх и удалите склеру и сетчатку. Выньте хрусталик из рассеченного глаза и удалите остатки ткани вокруг него. В следующем протоколе мы выполним вскрытие линз личинок и взрослых рыбок данио-рерио для анализа морфологии хрусталика.

После подтверждения достаточной седации трикаином используйте ножницы для микродиссекции, чтобы немедленно вырезать оба глаза у взрослой особи или личинки данио-рерио, и поместите оба глаза в 35-миллиметровую чашку Петри, изготовленную на заказ, с силиконовой формой для препарирования, заполненной PBS. Чтобы собрать хрусталик у взрослой рыбки данио, поместите глаз задней стороной вверх и вставьте щипцы под углом менее 45 градусов через диск зрительного нерва. С помощью диссекционных ножниц сделайте два или три радиальных разреза через сетчатку и склеру от диска зрительного нерва до цилиарной зоны в обездвиженном глазу и отклейте сетчатку и склеры, как лепестки цветов. Переверните глаз роговицей вверх и используйте плоскую сторону ножниц, чтобы обездвижить хрусталик косвенно, воздействуя на склеры и роговицу, одновременно используя щипцы для оттягивания сетчатки и прикрепленных тканей. Затем аккуратно срежьте лишнюю ткань с линзы.

Для сбора хрусталика личинки данио-рерио играет личиночный глаз задней стороной вверх на плоскую часть силиконовой формы PBS. И с помощью заточенной вольфрамовой иглы сделайте радионадрезы через сетчатку глаза и склеры, одновременно обездвиживая глаз другой иглой или щипцами. Затем аккуратно зачерпните линзу из диссоциированного глаза тупой стороной изготовленной на заказ иглой из вольфрамовой проволоки и осторожно оттяните прикрепленную ткань.