JoVE Encyclopedia of Experiments
Биология
0 просмотров • 2:05 мин • April 30th, 2023
- Сначала поместите рыбу под наркозом спинной стороной вверх в предварительно смоченную губку. Перед электропорацией введите генетический материал в ткань-мишень, в данном случае в часть переднего мозга, называемую конечным мозгом. Далее нанесите на голову небольшое количество геля для ультразвука. Кроме того, нанесите гель на кончики электродов для обеспечения эффективной работы. Поместите положительный электрод на вентральной стороне головы, а отрицательный — на тыльной стороне.
Теперь осторожно прижмите электроды к головке и подайте несколько импульсов электрического тока. Ток создает временные поры в плазматической мембране электропорированных ячеек и делает их проницаемыми. Ток также способствует перемещению отрицательно заряженных частиц, таких как плазмиды экспрессии ДНК или олигонуклеотиды РНК-интерференуклеотидов, присутствующих в окружающей среде, в клетки. В следующем примере мы будем использовать электропорацию для введения рекомбинантной плазмиды в эпендимоглиальные клетки, стволовые клетки, отвечающие за генерацию новых нейронов.
- Накройте конечный мозг рыбы небольшим количеством геля для ультразвука. Для электропорации животного, которому вводят плазмиду, извлеките губку из выталкивающей установки и погрузите внутреннюю сторону наконечников электродов в гель для ультразвука. Расположите рыбью голову между электродами, положительным электродом на вентральной стороне головы, а отрицательным — на тыльной стороне. Затем, все еще удерживая тело рыбы в губке, осторожно и точно прижмите электроды к головному мозгу и подайте ток с помощью ножной педали, удерживая электроды на месте до тех пор, пока не закончатся все пять импульсов.