Внутримышечная (внутримышечная) инъекция: доставка соединения в дорсальную мышцу взрослой рыбки данио-рерио

- Переложите рыбу под наркозом трикаина на влажную губку спинной стороной вверх. Поместите губку, несущую рыбу, под микроскоп. Расположите иглу для микроинъекций под углом 45 градусов от оси тела рядом с тыльной мышцей.

Затем найдите место перед спинным плавником, которое не покрыто чешуей, куда вы можете ввести иглу без приложения больших усилий. Затем аккуратно введите иглу и медленно введите в мышцу интересующее соединение вместе с маркером, таким как феноловый красный.

Если интересующее соединение содержит генетический материал, электропорируйте клетки, поместив электроды по обе стороны от места инъекции и подав ток. Ток делает мышечные клетки проницаемыми и способными эффективно поглощать генетический материал. После процедуры сразу же пересадите рыбок в восстановительный резервуар. В следующем протоколе мы проведем внутримышечную инъекцию взрослой рыбке данио, чтобы доставить ДНК-вакцину против микобактериоза.

Чтобы удержать рыбу в фиксированном положении во время инъекции, используйте в качестве набивки кусок губки с углублением, вырезанным посередине. Тщательно замочите губку в воде системы и установите ее в чашку Петри. С помощью пластиковой ложки переложите рыбку данио-рерио под наркозом на влажную губку брюшной стороной рыбы вниз в углубление. Под микроскопом поместите иглу под углом 45 градусов близко к спинной мышце рыбки данио. Затем найдите небольшое пятнышко без чешуи перед спинным плавником и введите иглу в мышцу.

Если вы чувствуете какое-либо сопротивление, попробуйте найти соседнее место. С помощью ножного переключателя постепенно вводите раствор плазмиды в мышцу. Под микроскопом фенольный красный должен быть виден по мере его попадания в мышечную ткань.

Электропорируйте рыбу сразу после инъекции, поместив электроды пинцетного типа с каждой стороны от места инъекции. Нажмите кнопку «Пуск» на электропораторе и подайте ему шесть импульсов по 40 вольт, 50 миллисекунд. Затем аккуратно переложите рыб в восстановительный резервуар. Наконец, после обезболивания рыбы в соответствии с текстовым протоколом, используйте ультрафиолетовый свет, чтобы увидеть экспрессию EGFP рядом с местом инъекции.