$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- Голодайте взрослой рыбе в течение 24 часов перед инъекцией, чтобы опорожнить желудочно-кишечный тракт и создать дополнительное пространство в брюшной полости. В день процедуры обезболите рыбок трикаином и поместите ее в прорезь во влажной губке брюшной стороной вверх.
Далее пипеткой нанесите нужное количество раствора для инъекций на кусок лабораторной пленки и втяните его в иглу для инсулина. Расположите иглу между брюшными плавниками под углом 45 градусов от передне-задней оси тела и осторожно введите ее по средней линии. Продвинуте иглу примерно на 1-2 миллиметра в брюшную полость, пространство между брюшной стенкой и внутренними органами, и медленно введите интересующий раствор. Подождите пять секунд, прежде чем вытащить иглу, чтобы избежать проливания. Теперь осторожно извлеките иглу.
После инъекции быстро пересадите рыб в резервуар для восстановления, содержащий свежую воду в аквариуме. Если рыба не начинает плавать сразу, покрутите воду возле жабр, чтобы помочь ей восстановиться после анестезии. В примере протокола мы будем вводить раствор Mycobacterium marinum мутантной рыбе RAG1 для изучения инфекции.
- Сначала выведите каплю разбавленного бактериального раствора объемом 5 микролитров на кусок парафиновой пленки. Затем втяните каплю в иглу для введения инсулина 30 калибра. Для этого эксперимента используйте рыбу в возрасте от пяти до восьми месяцев, одна из которых является рыбой дикого типа, а другая — рыбой-мутантом RAG.
Расположите этих рыб брюшной стороной вверх в прорезях из куска влажного вспененного пластика. Введите иглу инсулина между брюшными плавниками под углом 45 градусов. Держите отверстие иглы вверх, чтобы убедиться, что все отверстие находится внутри брюшной полости. Затем медленно введите бактериальный раствор. После этого аккуратно извлеките иглу и сразу же переложите рыб в восстановительный резервуар, наполненный свежей водой из аквариума.
Отбирайте образцы из используемого бактериального аликвота каждые 15 минут на планшетах 7H10. Инкубируйте эти образцы при температуре 29 градусов Цельсия в течение пяти дней, чтобы проверить дозу инфекции. Регулярно проверяйте самочувствие рыб, обязательно усыпляя рыб с симптомами инфекции, инкубируя их в воде с содержанием этилового эфира 3-аминобензойной кислоты более 0,02%.