Вскрытие мозга рыбок данио-рерио: техника нейробиологии рыб

- Поместите усыпленную рыбу на кровать для вскрытия и с помощью хирургического лезвия обезглавьте рыбу на уровне жабр. Держите голову вентральной стороной вверх и удаляйте мягкие ткани, пока не увидите зрительный хиазма — структуру, состоящую из зрительных нервов, которая соединяет мозг с глазами.

Перережьте зрительные нервы и удалите глаза. Теперь ориентируйте рыбу спинной стороной вверх и удалите части черепа, чтобы изолировать мозг. Перенесите мозг в чашку Петри, содержащую среду для вскрытия, чтобы поддерживать постоянный pH ткани. Наблюдайте за частями мозга.

Обонятельные луковицы представляют собой пару структур на переднем конце, соединенных с органами обоняния, которые улавливают сигналы запаха. Конечный мозг включает в себя области, связанные с памятью. Хабенула передает информацию от конечного мозга к другим частям мозга.

Оптический тектум является центром обработки сенсорной информации. Мозжечок играет роль в соматической моторике и равновесии. А мозговое вещество передает информацию от спинного мозга к головному. В следующем протоколе мы изолируем мозг взрослой рыбки данио, чтобы собрать нейральные стволовые клетки из разных областей.

Для начала подготовьте ложе для вскрытия, наполнив чашку Петри гелевыми пакетами. Затем накройте посуду соответствующей крышкой и выдерживайте ее при температуре минус 20 градусов по Цельсию. Как только гель застынет, достаньте блюдо из морозильной камеры и положите на его крышку чистый квадрат фильтровальной бумаги. Приступайте к обертыванию бумаги и тарелки полиэтиленовой пленкой.

Затем обработайте все инструменты для микродиссекции 70% этанолом. Поместите эти стерилизованные инструменты рядом с микроскопом для препарирования и расположите готовый станок для вскрытия под микроскопом с оптической подсветкой. Немедленно положите заранее подготовленный образец головы на вершину ложа для вскрытия и расположите его так, чтобы его спинная сторона была обращена вниз.

Затем с помощью ножниц сделайте продольный разрез через мягкие ткани от затылка до рта. После этого обнажите основание черепа щипцами и удалите все прилегающие ткани. Далее разрежьте одну из боковых стенок черепа, начиная с затылка и двигаясь к тектумовой области мозга. Повторите этот процесс для контралатеральной стороны. Приступайте к перерезанию зрительного нерва. А затем удалите две самые боковые стороны черепа на уровне тектума

Наконец, поверните головку брюшной стороной вверх. А щипцами отклейте самую апикальную часть черепа, чтобы обнажить мозг. После этого перенесите мозг и любые оставшиеся части черепа в чашку, содержащую среду для вскрытия, которая состоит из DMM F12 с добавлением пенициллина стрептомицина. С помощью пластиковой ручки микроножа под микроскопом очистите ткани мозга, стараясь не повредить ни одной нервной структуры. Используйте до двух мозгов рыбок данио, чтобы создать нейросферы, полученные из целого мозга.