Трансдукция для мечения опухолевых клеток PDX: введение лентивируса, экспрессирующего флуоресцентный маркер, в опухолевую клетку in vitro

Лентивирус — это ретровирус, который содержит генетический материал РНК. Этот вирус обеспечивает эффективный и стабильный метод введения трансгенов в линии раковых клеток. Начните с добавления нейраминидазы в пробирку, содержащую лентивирус, который экспрессирует зеленый флуоресцентный белок, или GFP. Держите пробирку при температуре 37 градусов Цельсия в течение одного часа, чтобы повысить эффективность связывания вируса.

Затем центрифугируйте пробирку, содержащую суспензию опухолевых клеток, чтобы получить гранулу. Добавьте маммосферную среду, содержащую полибрен, для ресуспендирования клеток. Полибрен – катионный полимер, повышающий эффективность лентивирусной инфекции. Теперь нанесите в планшет оптимальное количество опухолевых клеток на лунку в шестилуночном планшете для культуры тканей. Добавьте необходимое количество Лентивируса в каждую лунку культуральной пластины.

Перемешайте содержимое пластины и держите при температуре 37 градусов Цельсия в течение 96 часов с непрерывной подачей углекислого газа. Лентивирус проникает в клетку и высвобождает РНК. Вирусная обратная транскриптаза преобразует РНК в двухцепочечную ДНК, которая интегрируется в геном хозяина. Поместите пластин