3D-кокультура с прямым взаимодействием: совместное культивирование раковых клеток с моноцитами для изучения их взаимодействия

Для начала добавьте DQ collagen IV, флуоресцентный белковый субстрат, гасящий флуоресцентный краситель, в экстракт внеклеточного матрикса или ECME. Налейте этот экстракт в каждую лунку с двумя лунками на предметном стекле. Обозначьте первое как сокультуру, второе — как контроль. Добавьте соответствующее количество флуоресцентно меченой суспензии раковых клеток в лунки и инкубируйте предметное стекло при температуре 37 градусов Цельсия в течение желаемого времени, чтобы способствовать прикреплению клеток.

Добавьте необходимое количество клеточной суспензии моноцитов в первую лунку. Дайте ЭКМЭ застыть при 37 градусах Цельсия. Налейте в каждую лунку равное количество питательных сред для раковых клеток и моноцитов и инкубируйте предметное стекло при температуре 37 градусов Цельсия в течение желаемого времени в среде углекислого газа. В колодце кокультуры раковые клетки секретируют белки, такие как моноциты и хемоаттрактантный белок, для привлечения моноцитов.

В отличие от них, моноциты продуцируют матриксную металлопротеиназу или ММП, чтобы разрушить коллаген, способствуя инвазии раковых клеток. Понаблюдайте за предметным стеклом под конфокальным микроскопом. Деградация коллагена DQ и