Внутрипротоковая инъекция: введение инъекционной смеси в протоки молочной железы мыши

Внутрипротоковая инъекция — это метод доставки инъекционной смеси, которая может содержать раковые клетки, векторы экспрессии или терапевтическое средство, дополненное индикаторным красителем, в протоки молочной железы.

Для этой процедуры нагрузите шприц инъекционной смесью. Затем поместите мышь под наркозом вентральной стороной вверх на хирургическое ложе. Сделайте надрез на коже между паховой или пятой парой молочных желез. Осторожно отделите кожный лоскут от теменной брюшины, чтобы визуализировать протоковое дерево.

С помощью щипцов приподнимите сосок и аккуратно разрежьте его внешнюю часть, чтобы рассмотреть отверстие протока. С помощью пинцета приподнимите край кожного лоскута и осторожно введите иглу шприца в сосок, чтобы подать смесь для инъекций. Следите за движением индикаторного красителя в молочное протоковое дерево. Краситель распространяется по протоковому дереву, не просачиваясь в строму, что свидетельствует об успешной инъекции.

Подождите несколько секунд, чтобы избежать рассыпания, затем медленно извлеките иглу из места инъекции. Закройте разрез зажимом для раны. В соответствии с приведенным ниже протоколом мы выполним внутрипротоковую инъекцию для доставки аденовируса Cre, экспрессирующего в молочную железу мыши.

Используйте асептические методы на протяжении всей хирургической процедуры. Сделайте место разреза на коже длиной примерно в один сантиметр между двумя четвертыми паховыми молочными железами. Осторожно отделите кожный лоскут от теменной брюшины, чтобы визуализировать молочное протоковое дерево.

Осторожно удерживайте сосок с помощью щипцов часовщика, чтобы удалить внешний сосок, не разрезая близлежащую кожу с помощью ножниц для микродиссекции. Загрузите примерно три-пять микролитров инъекционной смеси аденовируса Cre в шприц Hamilton объемом 25 микролитров с прикрепленной металлической иглой 33 калибра.

Оцените объем инъекционной смеси в шприце на основе синего красителя, входящего в состав смеси. Аккуратно удерживайте край кожного лоскута тонким изогнутым пинцетом и медленно вводите смесь для инъекций аденовируса Cre в сосок, наблюдая за распространением синего красителя в молочном протоковом дереве. Поддерживайте скорость инъекции как можно медленнее, чтобы избежать повреждения просвета протока.

Об успешной внутрипротоковой инъекции свидетельствует распространение введенных жидкостей по всему протоковому дереву, не просачиваясь в стромальный компартмент. Осторожно извлеките иглу из соска, чтобы избежать утечки введенной жидкости. Осмотрите дистальную сторону молочной железы или область вокруг инъекционного соска.

Диффузия красителя в ближайшую строму, как показано здесь, указывает на инъекцию жировой подушки молочной железы, а не на успешную внутрипротоковую инъекцию. Закройте операционные раны и кожу раневыми зажимами.

Извлеките мышь из наркоза и положите ее на грелку внутри чистой клетки для восстановления. Следите за развитием опухоли молочной железы так, как описано в текстовом протоколе.