Органная кондиционированная среда: генерация среды из собранных клеток органов для исследований метастатического рака

Некоторые органы вырабатывают растворимые факторы и становятся предпочтительными местами для метастазирования рака молочной железы. Кондиционированная среда, приготовленная из этих собранных органов, может помочь идентифицировать и изучить такие факторы.

Начните с помещения собранного органа, такого как печень, в пробирку с холодным PBS и переворачивайте трубку вверх и вниз, чтобы удалить остаточную кровь органа. Поместите орган в чашку Петри. И с помощью скальпеля нарезать орган кубиками на мелкие кусочки.

Ресуспендируйте эти кусочки в пробирку, содержащую базальную среду с добавлением антибиотика для поддержки роста клеток и предотвращения загрязнения. Теперь вылейте клеточную суспензию в культуральную пластину и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия с непрерывной подачей углекислого газа в течение необходимого времени.

Во время инкубации эти клетки выделяют в среду метаболиты, факторы роста, белки внеклеточного матрикса. Далее переложите клеточную суспензию в центрифужную пробирку и добавьте свежую среду для ее разбавления. Центрифугируйте пробирку и отфильтруйте надосадочную жидкость, которая является кондиционированной средой, в свежую пробирку.

В следующем протоколе