zPDX-анализ инвазивности: исследование инвазивного поведения метастатических раковых клеток в ксенотрансплантатах эмбрионов данио-рерио

Ксенотрансплантаты эмбрионов рыбок данио полезны для изучения инвазии раковых клеток. Подготовка моделей ксенотрансплантатов путем введения флуоресцентно меченых метастатических раковых клеток и нераковых клеток в перивителлиновое пространство двух трансгенных эмбрионов. Перивителлиновое пространство — это пространство между перидермой эмбриона и желточным мешком. Дайте эмбрионам расти в течение нужного срока.

В течение этого периода метастатические раковые клетки агрессивно делятся в месте инъекции, в то время как нераковые клетки остаются стабильными. После инкубации с помощью пастеровской пипетки перенесите эмбрионы в стеклянную донную суспензионную чашку. Удалите лишнюю воду из яиц и расположите эмбрионы в нужном положении для визуализации. Держите крышку на чашке и поместите чашку под микроскоп с ярким полем.

Получение изображений и анализ инвазивного поведения обоих типов клеток. Метастатические раковые клетки имеют тенденцию проникать в кровеносные сосуды от места инъекции. Они движутся по кругу кровообращения, а затем внедряются в окружающие ткани для размножения. Напротив, нераковые клетки остаются в месте инъекции. В примере протокола мы будем вводить клетки рака молочной железы в перивителлиновое пространство и проток Кювье в моделях ксенотрансплантатов данио-рерио для изучения метастазирования.

Чтобы визуализировать метастазирование, с помощью пастеровской пипетки перенесите введенный эмбрион данио-рерио в чашку из полистирола со стеклянным дном и удалите лишнюю воду из яиц. Визуализируйте все тело эмбриона с помощью конфокального микроскопа, установленного на низкое увеличение, чтобы получить общую картину диссеминации опухолевых клеток.

Используйте лазер с яркостью 488 нанометров для визуализации сосудистой сети эмбриона рыбки данио-рерио и лазер с яркостью 543 нанометра для визуализации имплантированных опухолевых клеток, помеченных красным флуоресцентным маркером. Затем отсканируйте эмбрион в восемь-десять этапов, чтобы получить высококачественное изображение.