Инфляция индийских чернил: метод окрашивания для визуализации опухолевых узелков

Начните с того, что поместите усыпленную мышь вентральной стороной вверх на хирургическую кровать и закрепите конечности животного. С помощью ножниц разрежьте по средней линии через грудную клетку вверх до слюнных желез. Поместите наконечник пипетки под трахею, чтобы приподнять и изолировать ее. Поверните хирургическое ложе на 180 градусов. Введите иглу шприца с пятном индийских чернил в трахею и вводите чернила в легкие, пока не почувствуете сопротивление.

Раковые клетки выделяют большое количество молочной кислоты, которая генерирует сильный отрицательный заряд на поверхности клетки. Когда эти клетки окрашиваются индийскими чернилами, кислотным окрашиванием, поверхность клеток отталкивает пятно и остается неокрашенной.

С помощью ножниц разрежьте трахею и просуньте пинцет под легкие. Аккуратно вытяните легкие из тела животного. Промойте легкие в воде и переложите их во флакон с раствором Fekete, чтобы удалить излишки пятна и зафиксировать ткань в вытяжном шкафу. Опухолевые узелки выглядят белыми на темном фоне.

В следующем протоколе мы выполним технику индукции индийских чернил для проверки метастазирования в легкие.

Чтобы подтвердить метастазирование первичной опухоли в легкое, с