JoVE Encyclopedia of Experiments
Исследования рака
0 просмотров • 3:07 мин • April 30th, 2023
Начните с того, что поместите усыпленную мышь вентральной стороной вверх на хирургическую кровать и закрепите конечности животного. С помощью ножниц разрежьте по средней линии через грудную клетку вверх до слюнных желез. Поместите наконечник пипетки под трахею, чтобы приподнять и изолировать ее. Поверните хирургическое ложе на 180 градусов. Введите иглу шприца с пятном индийских чернил в трахею и вводите чернила в легкие, пока не почувствуете сопротивление.
Раковые клетки выделяют большое количество молочной кислоты, которая генерирует сильный отрицательный заряд на поверхности клетки. Когда эти клетки окрашиваются индийскими чернилами, кислотным окрашиванием, поверхность клеток отталкивает пятно и остается неокрашенной.
С помощью ножниц разрежьте трахею и просуньте пинцет под легкие. Аккуратно вытяните легкие из тела животного. Промойте легкие в воде и переложите их во флакон с раствором Fekete, чтобы удалить излишки пятна и зафиксировать ткань в вытяжном шкафу. Опухолевые узелки выглядят белыми на темном фоне.
В следующем протоколе мы выполним технику индукции индийских чернил для проверки метастазирования в легкие.
Чтобы подтвердить метастазирование первичной опухоли в легкое, сначала поместите мышь в лежачее положение на полистирольную доску и закрепите ноги, чтобы обеспечить беспрепятственный доступ к трахее. Опрыскайте мышь 70% этанолом. Затем с помощью ножниц сделайте разрез по средней линии средней части живота мыши через грудную клетку и вверх по направлению к слюнным железам. Определите трахею. Затем с помощью щипцов удалите окружающие ткани.
Далее, держа наконечник пипетки в одной руке, проденьте наконечник под трахею и аккуратно поднимите ткань вверх и подальше от тела. Держа трахею приподнятой, поверните рассекающую платформу на 180 градусов. Затем введите туберкулиновый шприц 27-го калибра объемом куб. см в трахею и полностью накачайте легкие индийскими чернилами до тех пор, пока не почувствуете сильное сопротивление.
Затем с помощью ножниц разрежьте трахею. Удерживая мышь на месте одним щипцом, вставьте другой щипцы под легкие и вытяните доли легких из мыши. Кратко промойте легкие в стакане с водой и перенесите ткань в вытяжной шкаф. Затем поместите легкие в стеклянный сцинтилляционный флакон, содержащий 3 миллилитра раствора Фекете, закрыв флакон крышкой, чтобы раствор не испарился. Через несколько минут перенесите легкие в чашку Петри и подсчитайте количество одиночных белых метастатических опухолевых узелков.
В данной статье подробно описан протокол подтверждения метастазов в легких на мышиной модели с использованием метода раздувания тушью (India ink). Метод включает хирургические манипуляции по изоляции трахеи и раздуванию легких тушью, что позволяет визуализировать метастатические опухолевые узлы.
Количественная визуализация метастатических узлов опухоли в доклинических моделях имеет решающее значение для подтверждения прогрессирования заболевания и оценки терапевтических гипотез. Метод инсуффляции индийских чернил позволяет четко обнаруживать и подсчитывать метастазы в легких, что способствует надежной валидации мишеней и снижению механистических рисков в онкологических программах разработки. Данный подход повышает прогностическую уверенность на ключевых этапах поиска и доклинических исследований, что позволяет обоснованно принимать решения о развитии портфеля препаратов.
Метод раздувания тушью (India ink inflation technique) интегрируется в процесс онкологических исследований, начиная от ранней валидации мишеней и заканчивая доклиническими исследованиями эффективности.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 22 августа 2026