Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 5:26 мин. • April 30th, 2023
Сначала взвесьте фрагмент ткани и измерьте его длину, ширину и высоту. Поместите ткань в чашку для культуры с питательной средой и нарежьте ее на мелкие кусочки с помощью скальпеля. Переложите все в С-образную трубку для гомогенизации с помощью пастеровской пипетки.
Поместите трубку в механический диссоциатор и выполняйте циклы по мере необходимости. Аппарат использует механические силы для извлечения жизнеспособных одиночных клеток из образца ткани, сохраняя при этом клеточную целостность, включая поверхностные белки. Сцедите гомогенат через сетчатое фильтр, закрепленное на трубке центрифуги.
Повторно гомогенизируйте оставшуюся ткань и процедите гомогенат через клеточный фильтр в трубку. Центрифугируйте гомогенат и удалите надосадочную жидкость. Теперь повторно суспендируйте клеточную гранулу в питательной среде и перенесите небольшое количество клеточной суспензии в пробирку, содержащую трипановый синий краситель.
После окрашивания перенесите клетки на предметное стекло гемоцитометра. Посчитайте прозрачные жизнеспособные клетки. Мертвые клетки впитывают пятно, так как их клеточная мембрана не повреждена. В следующем протоколе мы проведем неферментативную диссоциацию свежей ткани
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео