Анализ образования колоний мягких агаров: метод проверки влияния новых соединений на пролиферацию раковых клеток

Для начала возьмите соответствующую концентрацию расплавленной агарозы в конической трубке и добавьте в нее нужное количество теплой питательной среды. Аккуратно переверните, чтобы перемешать содержимое. Добавьте эту смесь в каждую лунку шестилуночной пластины и дайте ей застыть. Это нижний слой. Далее обработайте раковые клетки интересующим соединением и добавьте необходимую концентрацию агарозы.

Теперь вылейте эту смесь, содержащую нужное количество клеток на миллилитр, в каждую лунку. Это слой, содержащий клетки. Как только среда застынет, инкубируйте пластину при температуре 37 градусов Цельсия в течение недели. Приготовьте питательный слой, смешав агарозу со средой и дополните эту смесь интересующим составом. Аккуратно добавьте этот питательный слой в каждую лунку, дайте ему застыть и инкубируйте пластину при температуре 37 градусов Цельсия.

Повторяйте эту процедуру кормления еженедельно, чтобы пополнить клетки средой до образования колоний. Если исследуемое соединение является ингибитором онкогенности, оно будет подавлять рост клеток, что приведет к небольшому количеству колоний в лунках. В следующем протоколе мы проведем анализ образования колоний мягкого агара для изучения