Иммунофлуоресцентный анализ КТК: методика характеристики циркулирующих опухолевых клеток

- Для начала разведите изолированные циркулирующие опухолевые клетки или ЦОК до необходимой концентрации с помощью раствора, препятствующего связыванию, который защищает клетки от сдвига жидкости и повреждения давлением. Затем соберите предметное стекло микроскопа с полилизиновым покрытием и карту фильтра цитоцентрифуги в узел воронки цитоцентрифуги. Перенесите клеточную суспензию в воронкообразный порт сборки с последующим цитоцентрифугированием.

Центробежная сила концентрирует и наносит монослой ячеек на круглую область на предметном стекле. Изолируйте участок с клетками с помощью силиконового изолятора. После высыхания зафиксируйте клетки с помощью параформальдегида. Затем инкубируйте клетки с подходящим блокирующим раствором, содержащим белки, которые легко связываются с любыми неспецифическими сайтами связывания на поверхности клетки.

Теперь пометьте клетки флуоресцентным раствором антител, представляющим интерес. Помеченные флуорофорами антитела распознают и связываются с определенными молекулами-мишенями на поверхности клетки. Промойте образец, чтобы удалить все несвязанные антитела. Добавьте монтажный раствор, чтобы подготовить образец к визуализации.

Используйте флуоресцен