Эскалация дозы: метод развития лекарственной устойчивости в раковых клетках

- Ингибиторы тирозинкиназы, ИТК, блокируют связывание рецептора киназы с АТФ, предотвращая фосфорилирование. Начните с осаждения раковых клеток в питательную среду. Дайте им достичь благоприятной плотности, и перенесите ячейки в несколько лунок. После ночного роста распределите различные концентрации препарата в нескольких лунках и дайте клеткам расти в течение желаемого времени. Добавьте МТТ, водорастворимый краситель, чтобы измерить жизнеспособность клеток. Митохондриальные ферменты превращают МТТ в нерастворимый фиолетовый формазан внутри живых клеток.

Остановите реакцию, добавив подходящий солюбилизирующий агент, и измерьте формазан спектрофотометрическим способом. Этот метод называется анализом МТТ. Постройте график живых клеток, обозначенных формазаном, в зависимости от концентраций препарата. Рассчитайте ингибиторную концентрацию, IC₅₀, найдя концентрацию препарата, которая убивает 50% клеток с помощью программного обеспечения.

Затем вырастите раковые клетки в питательной среде и распределите их по трем разным тарелкам. После того как клетки достигнут субконфлюенции, добавляют 1/10 разведения концентрации IC₅₀. Дайте клеткам расти и проведите анализ МТТ. Повторите этот проце