Анализ клеточного цикла: подход к изучению регуляции клеточного цикла клеток рака легкого, трансфицированных микроРНК

- МикроРНК или микроРНК — это маленькая некодирующая РНК. После трансфекции или введения мРНК в клетку она образует белковый комплекс микроРНК. Комплекс нацелен на специфическую мРНК и связывается с ней, а также негативно регулирует ее экспрессию, останавливая прогрессию клеточного цикла.

Чтобы начать анализ, добавьте подходящий дегидратирующий фиксатор к собранной культуре клеток рака легких, трансфицированных микроРНК. Фиксатор сохраняет клетки, а также проникает в клеточную мембрану. Обработайте клетки смесью йодида пропидия, флуоресцентного красителя нуклеиновой кислоты и фермента рибонуклеазы.

Краситель проникает в клетки и окрашивает как ДНК, так и РНК. Ферменты специфически разрушают РНК, обеспечивая оптимальное количественное определение ДНК. Используйте проточный цитометр для определения доли клеток, остановленных в различных фазах клеточного цикла, на основе интенсивности флуоресценции отдельных клеток.

Клетки в фазах покоя и роста имеют более низкое содержание ДНК и, следовательно, меньшую интенсивность флуоресценции. Клетки в фазе Gap 2 с удвоенным количеством ДНК производят в два раза большую интенсивность флуоресценции. Клетки в фазе синтеза ДНК индуцируют значение фл