Микрочип антител: метод изучения экспрессии белка клеток рака легких, обработанных микроРНК

- Начните с добавления раствора биотина и меченого буфера в образец белка. Инкубируйте для облегчения прикрепления биотина к белкам. Добавьте стопорный реагент и вихрь. Затем поместите предметное стекло микрочипа антител в чашку, содержащую блокирующий реагент, чтобы предотвратить неспецифическое связывание антител. Промойте предметное стекло двойной дистиллированной водой, чтобы удалить блокирующий раствор. Поместите предметное стекло микрочипа в камеру. Смешайте образец биотинилированного белка с раствором для связывания и добавьте на предметное стекло, чтобы облегчить связывание целевых белков с соответствующими антителами. Переложите предметное стекло в чашку с буфером для мытья и замените буфер водой двойной дистилляции. Затем поместите предметное стекло в буфер для детектирования, содержащий флуоресцентно меченный стрептавидин, чтобы способствовать его связыванию с биотинилированными белками.

Инкубируйте блюдо в темноте, чтобы поддерживать интенсивность флуоресценции. Снимите предметное стекло и поместите его в сканер микрочипов. Сканер ищет флуоресцентные сигналы от стрептавидина, связанного с целевым белком. Основываясь на интенсивности флуоресценции, программное обеспечение анализирует степень экспрессии белка. В следующем протоколе мы выполняем микрочип антител для анализа изменений в экспрессии генов, связанных с клеточным циклом.

- Этот эксперимент направлен на выявление всех изменений экспрессии белков клеточного цикла с помощью обработки микроРНК. Соберите образцы белка в соответствии с процедурой, описанной в разделе трансфекции, и количественно оцените с помощью анализа BCA. Снимите предметные стекла с минус 4 градусов Цельсия за час до эксперимента, чтобы довести до комнатной температуры и удалить влагу. Возьмите 70 микрограмм образцов белка и подготовьте образцы слайдов в соответствии с инструкцией производителя, которая также пошагово описана в текстовом разделе.

Здесь следует отметить, что правильная промывка горок сверхчистой деионизированной водой является еще одним важным шагом, так как это поможет уменьшить фон горки. Кроме того, в этом эксперименте очень важно не пересушить предметные стекла до финального этапа. Наконец, отсканируйте предметное стекло с помощью микрочипа и проанализируйте данные.