Подготовка легких мыши к проточной цитометрии: получение клеточной суспензии из легочной ткани для проточного цитометрического анализа

- Начните с того, что возьмите усыпленную мышь и закрепите ее на доске для вскрытия с помощью лабораторного скотча. С помощью ножниц разрежьте кожу. Сделайте вертикальный разрез через диафрагму и разрежьте ребра, чтобы добраться до грудной полости, обнажая сердце и легкие. Далее сделайте небольшой разрез в левом желудочке сердца. Затем найдите правый желудочек и введите шприц, содержащий PBS, в просвет желудочка. Перфузируйте PBS через правый желудочек, позволяя крови вытекать из предварительно сделанного разреза в левом желудочке до тех пор, пока легкие не станут белыми. Извлеките легочную ткань, содержащую опухолевые узелки, и измельчите на мелкие кусочки.

Инкубируйте кусочки в буфере для переваривания легких. Коллагеназа в буфере для пищеварения легких помогает изолировать клетки, а ДНКаза помогает удалить ДНК из мертвых клеток. Полученную суспензию процедите через клеточное ситечко, чтобы удалить комки и сделать клеточную суспензию равномерной. Центрифугируйте и ресуспендируйте гранулу в буфере хлорида аммония и калия для лизиса остаточных эритроцитов. Центрифуга для сбора лейкоцитов и опухолевых клеток в гранулах. Ресуспендируйте гранулу в PBS с добавлением FCS, для поддержани