Анализ колониеобразования: оценка эффективности противоопухолевых препаратов на колониеобразующих клетках рака легких

- Анализ образования колоний — это анализ in vitro противоопухолевого препарата на рост, пролиферацию и дифференцировку раковых клеток в колонии в полутвердых средах. Для начала засейте раковые клетки в среде RPMI с добавкой для роста - фетальной бычьей сывороткой или FBS, и антибиотиком. Инкубируйте клетки в течение необходимого времени.

Далее соберите нужную концентрацию клеток в микрофуге-пробирку и центрифугу. Повторно суспендируйте гранулу в PBS. Приготовьте среду на основе метилцеллюлозы и распределите ее по разным пробиркам с FBS для обеспечения оптимального роста.

Добавьте соответствующее количество клеточной суспензии в пробирки и сделайте их вихревыми, чтобы смешать клетки со средой. Далее добавьте противораковые соединения в пробирки, и подготовьте контроль, добавив ДМСО. Вихревые трубки.

Добавьте эту клеточную смесь в культуральную пластину и инкубируйте в течение нужной продолжительности. После инкубации добавьте метилтиазол дифенилтетразолия бромид, или МТТ, и инкубируйте некоторое время. МТТ восстанавливает желтую соль тетразолия в жизнеспособных клетках до фиолетовых кристаллов формазана. Жизнеспособные колонии становятся фиолетовыми. Сделайте снимки с помощью цифро