Ксенотрансплантат данио-рерио: метод оценки противораковой эффективности терапии на онкогенность у рыбок данио in vivo

- Сначала поместите яйца в тарелку Петри и добавьте раствор Данио, чтобы сохранить свежесобранные яйца. Добавьте фенилтиомочевину для подавления пигментации и выдерживайте в течение нескольких дней. После инкубации дехорионируйте эмбрионы с помощью острых щипцов и дайте им расти дальше.

Затем засейте нужное количество раковых клеток в колбу для культуры и инкубируйте в течение ночи. Теперь добавьте противораковые соединения и далее инкубируйте. После инкубации добавьте флуоресцентный краситель для отслеживания клеток, который будет связываться с клеточной мембраной и окрашивать клетки.

Далее добавьте трипсин для диссоциации клеток и разведите клетки в фенольном красном растворе PBS перед процедурой для оценки pH. Поместите обезболенные эмбрионы данио-рерио на агаровую пластину. Теперь загрузите микрокапилляр суспензией раковых клеток и введите ее в желточный мешок эмбрионов.

Перенесите эмбрионы в культуральные планшеты, содержащие раствор Данио, и инкубируйте дальше. Далее перенесите несколько эмбрионов на предметное стекло и добавьте метилцеллюлозу для их обездвиживания. Поместите предметное стекло под флуоресцентный микроскоп и количественно оцените размер опухоли с помощью прогр