Иммуногистохимическое окрашивание: метод получения пространственной информации из тонких срезов тканей

- Начните с помещения тонкого участка ткани в раствор аммиака, чтобы обеспечить бережное извлечение антигена. Перенесите сечение на предметное стекло с полилизиновым покрытием. Отрицательно заряженные клетки связываются с положительно заряженным полилизином. Далее добавьте перекись водорода, чтобы блокировать активность эндогенной пероксидазы. Промойте предметное стекло в солевом растворе Tris-Buffered, TBS.

TBS способствует доступу антител к антигенам, разрывая белковые сшивки. Промойте срез блочным раствором, чтобы уменьшить связывание неспецифических антител. Добавьте в секцию первичные антитела и инкубируйте в течение ночи. Первичное антитело связывается со своим специфическим антигеном, присутствующим на поверхности клетки. Промойте предметное стекло с помощью TBS.

Добавьте конъюгированные с биотином вторичные антитела, которые прикрепляются к Fc-области первичного антитела. Промойте секцию ферментом стрептавидин-биотинпероксидаза. Далее добавьте в ткань хромогенный субстрат пероксидазы. Пероксидаза превращает хромоген в окрашенный нерастворимый продукт.

Противозаправьте ткани раствором гематоксилина. Гематоксилин связывается с кислыми компонентами клеток и окрашивает их в син