Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:59 мин. • April 30th, 2023
- Фотодинамическая терапия или ФДТ — это лечение на основе света с использованием молекул фотосенсибилизатора. Эти молекулы активируются светом определенной длины волны и превращают молекулярный кислород, присутствующий в клетках, в активные формы кислорода, вызывающие гибель клеток. Для начала разработайте модель мыши, несущей опухоль легкого, путем введения соответствующей концентрации суспензии клеток рака легких в нижний бок мыши, находящейся под наркозом. Следите за тем, пока опухоль не вырастет до соответствующего объема.
Затем готовят суспензию желаемого фотосенсибилизатора, загруженную в систему доставки на основе наночастиц при раке легкого. Введите эту суспензию в хвостовую вену мыши, находящейся под наркозом. Обеспечьте достаточное время для того, чтобы фотосенсибилизатор, содержащий наночастицы, достиг места опухоли и проник в раковые клетки.
Далее проведите обезболивание мыши. Расположите ФДТ-лазер на оптимальном расстоянии над опухолью, чтобы обеспечить равномерное освещение всего ее объема. Облучайте опухоль на соответствующей длине волны в течение желаемого времени. Держите мышь в клетке в темноте в течение 24 часов. Следите за ежедневными изменениями объема опухоли. У облученных мышей с опухолями, которым вводили фотосенсибилизатор, наблюдалось уменьшение объема опухоли. В этом протоколе мы проанализируем противоопухолевую эффективность гипокреллина В, фотосенсибилизатора, инкапсулированного в наночастицы керамидов гиалуроновой кислоты, у мышей с опухолями A549.
Соберите клетки A549 и повторно суспендируйте один миллион клеток в 0,1 миллилитра среды RPMI 1640. Поместите повторно подвешенные клетки на лед. Затем подготовьте мужскую обнаженную мышь BALB/C для инъекции. Затем загрузите клетки в шприц объемом 1 миллилитров, оснащенный иглой 26 калибра, и введите их в левый бок мыши. Измеряйте размер опухоли с помощью штангенциркуля каждый день.
Когда размер опухоли достигнет примерно 200 кубических миллиметров в объеме, начните эксперимент с предварительного взвешивания каждой мыши. Затем растворите наночастицы в PBS до конечной концентрации 2 миллиграмма на миллилитр и загрузите один микролитр суспензии на грамм мыши в шприц объемом 1 миллилитров, оснащенный иглой 26 калибра. Вводите наночастицы через инъекцию в хвостовую вену в нулевой и седьмой дни.
Через 24 часа после каждой инъекции сделайте мышь под наркозом и поместите опухоль под волокно фотодинамической терапии так, чтобы он находился на расстоянии одного сантиметра от волокна.
Для достижения наилучшего результата важно покрыть светом всю поверхность опухоли.
Наденьте лазерные защитные очки, выключите выключатель в комнате и подсвечивайте опухоль лазером фотодинамической терапии в течение 500 секунд в первый и восьмой дни. После лазерной обработки держите мышей в клетках в темноте в течение 24 часов. Визуальный контроль объема опухоли и изменений в месте опухоли каждый день. Используйте штангенциркуль для измерения размера опухоли и делайте снимки участков опухоли каждый день, чтобы проверить наличие поверхностных изменений.