Выделение экзосом: метод отделения экзосом из плазмы у пациентов с немелкоклеточным раком легкого

- Экзосомы — это небольшие связанные с мембранами везикулы, несущие биомолекулы, такие как липиды, белки, ДНК, мРНК и микроРНК. Экзосомы высвобождаются различными типами клеток во внеклеточное пространство и могут быть выделены из биожидкостей, таких как плазма.

Для начала центрифугируйте образец плазмы для удаления клеток и мусора. Перенесите надосадочную жидкость плазмы в свежую пробирку. Обработайте плазму ферментом рибонуклеазой в нужной концентрации. Инкубируйте образец на нагревательном блоке при температуре 37 градусов Цельсия в течение соответствующего времени.

Фермент разрушает любую свободную РНК в образце, в то время как экзосомальная РНК остается защищенной. Разбавьте пробу с помощью PBS. Далее добавьте раствор фермента протеиназы К в нужной концентрации и инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия в течение соответствующего времени. Протеиназа К разрушает основную массу белков плазмы. Он также инактивирует ранее добавленный фермент рибонуклеазу, тем самым устраняя риск деградации экзосомальной РНК во время последующей обработки.

Добавьте подходящий объем буфера для осаждения экзосом, чтобы облегчить отделение экзосом от плазмы. Центрифугируйте образец для получени