Инстилляция и фиксация легких: введение жидкости в трахею и фиксация легких для измерения фиксированного объема легких

- Инстилляция легких применяется для введения вещества непосредственно в трахею для анализа легких мышей с онкологическими или другими патологиями. Сначала поместите мышь под наркозом на наклонную платформу для интубации и сбрейте волосы на шее. Сделайте небольшой разрез ножницами ниже шеи и аккуратно потяните кожу с помощью щипцов, чтобы раскрыть трахею. Введите катетер в трахею через рот и осмотрите его через разрез. Введите примерную жидкость в трахею и быстро надуйте легкие, вводя воздух пустым шприцем для правильного распределения жидкости.

Закройте рану и поместите мышь в операционную камеру. По истечении нужного срока принесите в жертву мышь и обнажите легкие. Надуйте его с помощью фиксатора, чтобы количественно определить общую емкость легких. Поместите легкие в трубку с фиксатором. Измерьте фиксированный объем легких, используя принцип Архимеда. Опустите легкие в воду и прижмите их с помощью проводного устройства. Обратите внимание на вес воды, вытесняемой погруженными в воду легкими. Доля объема легких в неподвижном левом легком обычно меньше, чем измеренная in vivo.

- Перед началом процедуры вручную согните кончик коммерческой канюли для внутривенного введения длиной 1 дюйм 20 калибра в небольшой изгиб. Затем после подтверждения анестезии отсутствием реакции на защемление пальца ноги нанести мазь на глаза взрослой мыши и закрепить мышь в лежачем положении на наклонной площадке с большим канцелярским бандажем и шовными петлями. Побрейте брюшную часть шеи и продезинфицируйте кожу 70% спиртом. Затем с помощью острых ножниц делают небольшой хирургический разрез в области шеи, примерно на 12 миллиметров ниже нижнего резца.

Затем с помощью щипцов осторожно подтяните кожу в области шеи каудально, пока не станет видна вентральная стенка трахеи. Затем аккуратно втяните язык и введите канюлю с загнутым концом, наклоненным в сторону брюшной поверхности мыши. Снова осторожно потянув за кожу шеи, как только что показано, введите канюлю в трахею. Когда катетер можно будет наблюдать в трахее, продвинуте катетер примерно на 5 миллиметров, чтобы пропустить голосовые связки.

Теперь поместите наконечник гелевой пипетки, загруженной 50 микролитрами инстиллята, в нижнюю ступицу катетера. Подтвердите движение жидкости в наконечнике синхронно с дыханием мыши, затем введите инстиллят. С помощью шприца объемом 1 миллилитр немедленно надуйте в легкие 0,6 миллилитра воздуха через катетер, чтобы помочь распределить жидкость глубоко в легких, затем удалите канюлю. Закройте операционную рану небольшим количеством цианоакрилатного клея и поместите мышь в индивидуальную клетку с наблюдением до полного ее восстановления.

После заключительного экспериментального временного отрезка сделайте небольшой надрез на шее животного, чтобы обнажить вентральную сторону трахеи. Затем введите в трахею острый кончик иглы 18-го калибра. С помощью нитки завяжите иглу в трахею и осторожно вскройте грудную клетку с разрезом по средней линии. Затем отрежьте диафрагму и удалите боковые стенки грудной клетки, чтобы обнажить легкое. Затем убедитесь, что в фиксирующей трубке нет воздуха, пропустив формальдегид на конец запорного крана. Затем подсоедините резервуар с формалином и заполненную трубку непосредственно к нижнему концу иглы для трахеостомы.

Установите верхнюю поверхность формальдегида на 25 сантиметров выше уровня рта и откройте запорный кран, чтобы надуть легкие с фиксатором. После того, как вы оставили легкие под давлением не менее 20 минут, медленно потяните иглу назад, чтобы обнажить больше неканюлированной трахеи, одновременно перевязывая трахею за концом иглы-огрызка. Когда трахея будет надежно перевязана, снимите запорный кран и аккуратно рассеките легкие. Затем поместите легкие в формальдегид на ночь.

Здесь показано типичное устройство для удержания легких на месте во время фиксированного объема легких, изготовленное из пластиковых пипеток и тонкой проволоки 20 калибра. Чтобы измерить фиксированный объем легких, сначала рассеките сердце и любую другую нелегочную ткань легких. Затем поместите на весы стакан с примерно 200 миллилитрами воды, оснащенный проволочным опорным устройством, и задержите оборудование.

Затем извлеките устройство, поместите легкое на поверхность воды и с помощью устройства прижмите ткань под водой, следя за тем, чтобы легкое, шов или любая часть устройства не касались боковых сторон или дна стакана. Запишите вес на весы. Это число отражает объем вытесненной воды и, таким образом, является прямым показателем объема легких. Затем высушите легкое на дворнике, снова протрите стакан прибором и повторите измерение объема легких. Затем следует усреднить два измерения объема.