Трансплантация островков поджелудочной железы: метод имплантации островков поджелудочной железы в переднюю камеру глаза мыши для визуализации in vivo

- Островки поджелудочной железы содержат бета-клетки, которые секретируют инсулин. У пациентов с сахарным диабетом 1 типа инсулин-продуцирующие бета-клетки становятся дисфункциональными. Трансплантация островков у таких пациентов открывает возможности для обеспечения гликемического контроля. Для оценки эффективности трансплантации мы используем животные модели, такие как мышь, передняя камера глаза которой является оптимальным местом для трансплантации и визуализации in vivo.

Для пересадки островков поместите мышь под наркозом на теплую грелку и введите подкожно в заднюю часть мыши бупренорфин, обезболивающее средство для облегчения боли. Далее вставьте нос мыши в маску для носа для непрерывной подачи кислорода и анестетика изофлурана.

Закрепите голову мыши в держателе для головы, чтобы обнажить глаз, и аккуратно втяните веко с помощью тупых щипцов, чтобы вытащить глаз. Загрузите канюлю с флуоресцентно помеченными островками. Вставьте половинчатый кончик канюли в роговицу. Приподнимите роговицу, аккуратно распределите островки, снимите канюлю и нанесите гель для глаз.

По истечении нужной продолжительности поместите мышь под двухфотонный микроскоп и сделайте снимки. Вы можете наблюдать, как кровеносные сосуды образуют микрососудистую сеть по всему трансплантату. В следующем протоколе мы выполним трансплантацию островков поджелудочной железы человека в переднюю камеру глаза мыши.

Для начала поместите мышь на теплую грелку, поместите ее в держатель для головы и наденьте маску для носа. Большим и указательным пальцами слегка приподнимите голову. Закрепите его металлическими деталями по бокам, убедившись, что наушники фиксируют голову прямо под ушами. Подкожно введите раствор бупренорфина в заднюю часть мыши. Аккуратно втяните веки пересаживаемого глаза с помощью тупых щипцов. Вытащите ушко и неплотно зафиксируйте его пинцетом, покрытым полиэтиленовой трубкой.

После переноса островков в чашку Петри с PBS соберите примерно от 20 до 30 островков в глазной канюле. С помощью иглы 25 калибра скосите вверх, осторожно введите кончик в роговицу и сделайте один боковой разрез. Осторожно приподнимите роговицу с предварительно загруженной канюлей и медленно выпустите островки в глаз. Медленно втяните канюлю и нанесите гель для глаз на глаз.

Через 10 минут снимите щипцы, удерживающие веко, и верните глаз в нормальное положение. Для визуализации имплантированных островков человека с помощью двухфотонной микроскопии поместите платформу держателя головки под микроскоп и нанесите глазной гель на глаз в виде иммерсионной жидкости между роговицей и хрусталиком. Расположите глаз под объективом и изобразите имплантированные островки человека, как описано в рукописи текста.