Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 5:11 мин. • April 30th, 2023
- Органоиды — это крошечные трехмерные клеточные культуры, полученные из тканеспецифических стволовых клеток. Они геномно стабильны, но генетически модифицируются путем трансфекции и, таким образом, идеально подходят для генетических исследований. Для трансфекции органоиды засеивают в многолуночную культуральную тарелку с определенной питательной средой и инкубируют в течение желаемой продолжительности. Затем добавьте на пластину смесь для диссоциации, чтобы помочь диссоциации органоидных клеток. Переложите смесь в пробирку и центрифугу. Ресуспендируйте органоидную гранулу в буфере для электропорации, содержащем флуоресцентно меченую плазмидную ДНК. Буфер стабилизирует клетки и предотвращает их гибель из-за электрического напряжения.
Переложите смесь в кювету и электропорируйте ячейки. Электрические импульсы через клеточную мембрану приводят к временному образованию пор, что способствует поглощению плазмидной ДНК в клетку. После электропорации немедленно добавьте питательную среду в клеточную суспензию и переложите смесь в пробирку. Теперь центрифугируем ячейки. Повторно суспендируйте гранулу в матрице основания и перенесите в многолуночную пластину для полимеризации. Поместите пла
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео