Выделение островков поджелудочной железы с помощью перфузии коллагеназы: ферментативный метод выделения островковых клеток поджелудочной железы

- Островковые клетки поджелудочной железы вырабатывают необходимые гормоны, участвующие в эндокринных функциях. Чтобы изолировать островки, сначала обезопасьте усыпленную мышь и хирургическим путем обнажите ее брюшную полость. Отведите в сторону печень и кишечник, чтобы найти и пережать общий желчный проток. Определите ампулу Фатера, протока, образованного слиянием поджелудочной железы и общих желчных протоков.

Далее введите раствор фермента коллагеназы в общий желчный проток. Обратный поток из протока успешно раздувает поджелудочную железу, способствуя индуцированной коллагеназой диссоциации тканей поджелудочной железы. Исрежьте поджелудочную железу в пробирку, содержащую больше раствора коллагеназы. Механически измельчите ткань и инкубируйте, чтобы помочь перевариванию тканей коллагеназой.

После получения однородной суспензии следует остановить ферментативное расщепление, добавив раствор, содержащий белки, ингибирующие активность коллагеназы. Центрифуга для сбора тканевых гранул. Повторно суспендируйте гранулу в среде с соответствующим градиентом плотности, нанесите на нее слой подходящего буфера и центрифугируйте для получения градиентных слоев.

Соберите островки из слоя, образо