Необратимая электропорация: методика абляции опухоли поджелудочной железы у мышей

- Необратимая электропорация или IRE — метод удаления опухолей поджелудочной железы путем подачи коротких высоковольтных импульсов электрического тока на опухоль, вызывающих необратимое повреждение опухолевых клеток. IRE обладает высокой селективностью и доступностью для целевой области опухоли. Он не вызывает теплового повреждения близлежащих здоровых клеток, что делает его перспективной противоопухолевой терапией.

Начните с того, что поместите мышь под наркозом сбоку и рассеките ее брюшную полость, чтобы найти опухоль на поверхности поджелудочной железы. Далее с помощью электродов закрепите место опухоли, и вводите целевые импульсы электрического тока в течение нужного промежутка времени. Электрический ток, превышающий определенный порог, вызывает образование постоянных пор в клеточной мембране опухолевых клеток, препятствуя возвращению клетки в состояние гомеостаза.

Эти поры заставляют внутриклеточное содержимое клетки выходить наружу, что приводит к постепенной гибели клеток в результате апоптоза. Теперь закройте брюшную полость и оставьте мышь восстанавливаться в домашней клетке. Наконец, следите за поджелудочной железой на предмет уменьшения размера опухоли после электропорации. В следующем протоколе мы продемонстрируем метод выполнения необратимой электропорации для разрушения опухолей поджелудочной железы у мышей.

- Прежде чем опухоль достигнет 6 миллиметров в диаметре, положите животное под наркозом на правый бок, чтобы обеспечить доступ к опухоли, и используйте машинки для стрижки и спиртовой тампон для очистки места опухоли. С помощью щипцов приподнимите кожу непосредственно под опухолью и введите два игольчатых электрода через кожу, параллельно телу, чтобы зафиксировать опухоль, следя за тем, чтобы электроды не проникли в брюшную полость.

Настройте электропоратор на подачу импульсов длительностью 100 микросекунд с частотой 1 герц и напряжением 1500 вольт на сантиметр, что в сумме составляет 150 импульсов, и используйте ножную педаль для подачи импульсов, разделяя каждый набор из 10 импульсов на 10 секунд, чтобы обеспечить рассеивание тепла между каждым набором импульсов.

- Поскольку мышечные подергивания происходят во время родов IRE и более выражены во время начального набора импульсов, убедитесь, что электроды все еще находятся в нужном месте и что животное все еще находится под действием седативных препаратов после каждого набора импульсов.

- По прошествии не более 200 секунд дозирования снимите электроды и запишите фактическое подаваемое напряжение, отображаемое на электропораторе. Затем верните мышь в клетку. При ИРЭ ортотопической опухоли, через 8–10 дней после имплантации опухоли, используйте щипцы с тупым носом для экстернализации опухоли с помощью щипцов и плотно захватывайте опухоль платиновыми электродами пинцета.

Подайте импульсы электропорации, как показано выше, удерживая опухоль экстернализованной для последнего набора импульсов в течение как минимум 60 секунд для мониторинга любых признаков кровоизлияния. Затем верните опухоль в брюшную полость и закройте разрез, как показано на рисунке, наблюдая за животным до полного выздоровления.